Стадии развития эмбриона по дням: стадии развития после переноса, рост, таблицы норм

Содержание

стадии развития после переноса, рост, таблицы норм

Насколько подробная информация занесена в  эмбриологический лист хорошо говорит о контроле качества в лаборатории. Чем больше информации занесено, тем лучше и качественнее эмбриологи могут провести статистический анализ данных, исключить ошибки на ранних этапах и в последующем улучшить протоколы процедур. История развития каждого эмбриона позволяет выбрать лучший эмбрион.

Что происходит в «0 день»?

В этот день у женщины на пункции получают яйцеклетки, которые окружены гранулезными клетками (кумулюсом). Из-за плотного слоя гранулезных клеток качество и зрелость яйцеклеток сразу определить точно невозможно, их не видно. Мужчины сдают сперму, и по показателям спермограммы эмбриолог принимает решение о методе оплодотворения: ЭКО, ИКСИ или ИМСИ. В зависимости от метода оплодотворения яйцеклетки либо очищаются от гранулезных клеток (ИКСИ, ИМСИ, ПИКСИ), либо нет (ЭКО). После чистки проводится точная оценка состояния ооцита.

 Ооциты могут быть зрелыми (MII), незрелыми (MI и GV) или дегенеративными (Deg).

Стадии созревания ооцита в фолликуле

Возможные изменения в наружной оболочке ооцита

В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII. В ядрах зрелых ооцитов 23 хромосомы, в незрелых — 46 хромосом, поэтому их использование неэффективно. При нарушениях процессов созревания ооцита в фолликуле или при неправильно введенном триггере (ХГЧ) при стимуляции существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых — MI и GV. Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).

При проведении ИКСИ или ИМСИ в каждую зрелую клетку эмбриолог вводит один сперматозоид. При ЭКО к неочищенным клеткам добавляют обработанные специальными растворами сперматозоиды. Затем оплодотворенные яйцеклетки ставят в инкубатор. 

Оплодотворение при ЭКО и ИКСИ

Что происходит в «1 день»?

Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) оценивают произошло оплодотворение или нет. Если оплодотворение прошло нормально образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы, их обозначают 2pN. 

Если пронуклеусов не видно, то скорее всего оплодотворение не случилось (0pN). Иногда мы наблюдаем 1 пронуклеус (1 pN), в этом случае оплодотворение произошло, но за такими эмбрионами нужно пристально наблюдать, как правило, они имеют сниженный потенциал развития. Если мы наблюдаем 3 и более пронуклеусов, то оплодотворение произошло неправильно. «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.

Образование пронуклеусов у эмбриона 1-го дня

Что происходит на «2 день»?

Пронуклеусы исчезают и эмбрионы начинают делиться. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа после оплодотворения. Эмбриологи используют численно–буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква — их качество. Для обозначения эмбриона отличного качества используется буква «А», хорошего — «B», низкого — «С». 

Для второго дня культивирования перспективными считаются эмбрионы — 4А, 4В, 5A, 5B.

Деление эмбриона на второй день

Что происходит на «3 день»?

Эмбрионы продолжают делиться. Оценка качества эмбрионов проводится через 72-74 часа после оплодотворения. В идеале дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление).  

Для третьего дня культивирования перспективными считаются эмбрионы с восьмью и более бластомерами (8А, 8В, 9А, 9В, 10А, 10В).  

Дробление эмбриона на 3 день

Эмбрион высокого и низкого качества

Что происходит на «4 день»?

К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию — границы его клеток становятся неразличимы. Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится из-за малой информативности данной стадии развития.  При проведении преимплантанционного генетического теста (ПГС) на этой стадии проводят хетчинг эмбрионов — проделывают отверстие в оболочке эмбриона. 

Компактизация эмбриона на 4 день

Что происходит на «5 и 6 день»?

На пятые-шестые сутки, в идеале через 120 часов и более после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту. Это стадия развития эмбриона, эмбрион на этой стадии похож на полый шар, внутри которого к стенке прикрепляется плотный комок клеток (внутриклеточная масса), стенки большого шара называют трофэктодермой. Впоследствии трофэктодерма участвует в образовании плаценты, а внутриклеточная масса — в образовании плода.

Оценка качества бластоцист учитывает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») (первая заглавная буква) и окружающих ее клеток – трофэктодермы (от «A» до «C»)(вторая заглавная  буква). 

Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 6, имеющие многоклеточную ВКМ и трофэктодерму – 5AA, 5AB, 5BB, 4AA, 4AB, 4BB, 3AA, 3AB, 3BB, 6AA, 6AB, 6BB. 

Образование бластоцисты на 5-6 день

Оценка качества бластоцисты второго размера

Оценка качества бластоцисты третьего размера

Оценка качества бластоцисты четвертого размера

Оценка качества бластоцисты пятого размера

Оценка качества бластоцисты шестого размера

 

Когда делают перенос (обозначение ET)?

Перенос можно делать в любой день развития. Вероятность беременности выше при переносе на 5 день развития. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки и закрепиться в эндометрии. Эмбриолог может помочь бластоцисте выйти из оболочки, сделав отверстие. Данная процедура называется хетчинг. Ее проводят непосредственно перед переносом.

Когда эмбрионы замораживают?

Обычно замораживают эмбрионы на 5-6 день развития, когда они достигают стадии бластоцисты. Таким образом, эмбрионы живут в лаборатории максимум 7 дней.  В итоге, на эмбриологическом листе можно увидеть таблицу, в которой каждая манипуляция фиксируется. Судьбу и развитие каждого эмбриона можно проследить. Такое возможно, если в лаборатории не используется групповое культивирование эмбрионов, а каждый эмбрион занимает свою каплю со средой. 

 

Зрелость и метод оплодотворения

День после пункции

Итог по развитию

Объяснение эмбриолога

 

0

1

2

3

4

5

6

   

1

MII
ИКСИ

2pN

4a

8a

mor

4AA

 

Криоконсервация или перенос

Идеальное развитие

2

MII
ИКСИ

1pN

4b

10b

16b

1BB

4BB

Криоконсервация

Очередность переноса после 2pN-эмбрионов

3

MII
ИКСИ

3pN

         

Утилизация

Неправильное оплодотворение

4

MII
ИКСИ

0pN

0pN

       

Утилизация

Оплодотворения не было

5

MII
ИКСИ

0pN

4b

9b

mor

4BB

 

Криоконсервация или перенос

Очередность переноса после 2pN-эмбрионов после 1 pN-эмбрионов

6

MII
ИКСИ

2pN

3b

6c

6c

6c

Утилизация

Остановка в развитии с 3-го дня

7

MII
ИКСИ

2pN

2a

4a

8a

mor

3BB

Криоконсервация

Хорошее развитие

8

ЭКО

2pN

10а

mor

1AB

5AB

Криоконсервация

Отличное развитие

9

ЭКО

MI

          Утилизация

 

Незрелая клетка

***

Список литературы:

  • Леонов Б.В., Гусарева А.А. Эмбриологические аспекты программы ЭКО и ПЭ. // Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии. / Медицинское информационное агентство, Москва, 2005.
  • Боярский К.Ю. Молекулярные основы фолликулогенеза // Проблемы репродукции. 2006. — N4. — С. 26 — 37.
  • Василевская С.Е., Иванов A.B., Боярский К.Ю. Классификация и морфометрические показатели жизнеспособных бластоцист // Проблемы репродукции. 2004. — Т. 3, N 2. — С. 42 — 45.
  • Белоусов Л.В. Введение в общую эмбриологию. М., 1980. 
  • Белоусов Л.В. Основы общей эмбриологии. М., 1993. 304 с. Бонашевская Т.И., Беляева Н.Н., Кумпан Н.Б., Панасюк Л.В. Морфофункциональные исследования в гигиене. 
  • М.Голиченков В.А. Эмбриология. М., 2004. 224 с.
  • Amorocho B, Gómez E, López D, Santana A, Martinez JC, Landeras J. Cultivo prolongado del embrión hasta blastocisto: cultivo secuencial. In J Remohí, A Cobo, JL Romero, MJ de los Santos, A Pellicer (eds) Manual Práctico de Esterilidad y Reproducción Humana. Laboratorio de reproducción asistida. 2008. Editorial McGraw-Hill / Interamericana de España, S.A.U. 3ª edición, pp.225 — 230.
  • Glujovsky D, Farquhar C, Quinteiro Retamar AM, Alvarez Sedo CR, Blake D. Cleavage stage versus blastocyst stage embryo transfer in assisted reproductive technology. Cochrane Database Syst Rev. 2016 Jun 30;(6):CD002118.

Развитие эмбриона по дням — Клиника «К+31»

Метод экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) подразумевает собой оплодотворение яйцеклеток женщины сперматозоидами мужчины и дальнейшее культивирование эмбрионов в течение 5-6 суток вне женского организма. Эмбриологический этап завершается переносом эмбрионов в полость матки или их криоконсервацией. При этом выбирают эмбрионы с наиболее высокой вероятностью их имплантации в стенку матки, а значит, наступления беременности.

Этапы развития эмбрионов

Эмбриональный (зародышевый) период – это период развития эмбриона от момента зачатия до девятой недели беременности. Первую неделю эмбрионального развития называют преимплантационным периодом, так как эмбрион способен существовать и развиваться в питательной среде при отсутствии физического контакта с материнским организмом. Этот период завершается имплантацией эмбриона в стенку матки (эндометрий), что способствует дальнейшему развитию эмбриона.


Преимплантационный период включает следующие этапы развития эмбриона:

0-е сутки: оплодотворение яйцеклетки сперматозоидом.

1-е сутки: образование зиготы – одноклеточного эмбриона с двойным набором хромосом, сформированного в результате слияния материнского и отцовского генетического материала.

2-е сутки: дробление — этап развития, при котором эмбрион начинает делиться, не увеличиваясь в размерах. При этом эмбрион развивается только благодаря материнскому генетическому материалу, хранившемся в яйцеклетке.

3-е сутки: также включает в себя этап дробления. При этом, чем более синхронно происходит деление бластомеров, тем больше вероятность благоприятного исхода. К началу третьих суток, для нормального дальнейшего развития, эмбрион должен состоять из 6-12 клеток. Также в этот день начинается компактизация – процесс образования связей между бластомерами эмбриона. Этот процесс обусловлен активацией собственного генетического материала. Такой многоклеточный эмбрион с возникшими межклеточными связами называют морулой.

4-е сутки: продолжаются процессы дробления и компактизации. При этом внутри эмбриона начинает формироваться полость.

5-е сутки: образование бластоцисты – стадии развития эмбриона, в котором различают два типа клеток: одни впоследствии образуют плод, другие сформируют детскую часть плаценты. Рост эмбриона на этой стадии обусловлен двумя процессами — увеличением числа клеток и объема полости бластоцисты.

6-7-е сутки: эмбрион покидает защитную оболочку, чтобы имплантироваться в эндометрий.

После имплантации зародыша в эндометрий содержание ХГЧ в крови матери начинает расти. Именно поэтому для диагностирования беременности сдают анализ крови на 14-й день после переноса эмбриона.


Процесс оплодотворение яйцеклетки у женщин по дням: сроки, признаки.

Центральным звеном клиники ЭКО является эмбриологическая лаборатория. Для каждой попытки ЭКО заводится «Эмбриологический протокол», в котором отражается судьба каждого эмбриона от момента получения ооцитов и до момента переноса или замораживания.

Сразу после получения ооцитов и сперматозоидов производится их морфологическая оценка. По результатам анализа эякулята (спермограмме) принимают решение о способе оплодотворения – ЭКО или ИКСИ.

Оценка ооцитов

Оплодо-
творение

Стадия развития эмбрионов

Вид ВРТ (ЭКО/ИКСИ)

Комментарий

День после пункции

0

1

2

3

4

5

Итог

Дата

07.03

08.03

09.03

10.03

11.03

12.03

13.03

Эмбриолог

Калинина

Сергеев

Калиниа

Калиниа

Калиниа

Сергеев

1

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

6 AB

Cryo (Bl Ab 3)

Cryo

ИКСИ

2

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

6 BA

Cryo (Bl Bb 3)

Cryo

ИКСИ

3

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Bb 2)

Cryo

ИКСИ

4

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Ab 2)

Cryo

ИКСИ

5

Калинина И.И.

0-1

2 pN

4 AB

7 AB

ET (Bl Aа 3)

ET

ЭКО

6

Калинина И.И.

0-1

1 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Bb 3)

Cryo

ЭКО

7

Калинина И.И.

0-1

1 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Bс 2)

Cryo

ЭКО

8

Калинина И.И.

0-1

2 pN

4 AB

8 AB

ET (Bl Аb 4)

ET

ЭКО

9

Калинина И.И.

0-1

2 pN

6 AB

8 B

8B

ЭКО

Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.

В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.

Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).


Рис 1. Ооциты, полученные при пункции яичников после удаления кумулюса (денюдации). А — MII, Б – MI, В – GV. Pb – полярное тельце, ZP – блестящая оболочка

Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.

Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов.                          А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса     Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.

Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).

2-й день (4А)                          3-й день (8А)                 4-й день (comp)

Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.

Для второго дня культивирования перспективными считаются эмбрионы с четырьмя бластомерами — 4А, 4АВ, 4В. Для третьего — восьмиклеточные (8А, 8АВ, 8В). Эмбрионы плохого качества (ВС, СВ, С) как правило не переносят, оставляют до пятого дня и при формировании нормальной бластоцисты замораживают или переносят в матку. В случае неравномерного дробления (наличия бластомеров разной величины) потенциал эмбриона к имплантации снижен, и обозначается это приставкой «un», например 3Вun. Наличие фрагментов цитоплазмы обозначают «fr», например 8ВСfr (Рис.4). Оценивается и наличие вакуолей. При их визуализации ставится отметка «vac». В норме каждый бластомер несет одно ядро, если хотя бы в одном бластомере визуализируется больше одного ядра, это называется мультинуклеацией (mN) и указывает на значительную вероятность хромосомной патологии данного эмбриона.


Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).

К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.


Рис 5. Стадия компактизации 4-е сутки культивирования A – p.comp Б — comp

На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.

Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.

Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.

Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.

Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.

В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.


Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)

А – световая микроскопия HMC контраст Б – Сканирующая электронная микроскопия — ZP – блестящая оболочка TE – трофэктодерма ВКМ – внутренняя клеточная масса

Читайте также:

Этапы развития эмбриона после переноса по дням и в естественном цикле

Парам, планирующим беременность необходимо знать, как формируется плод в первые дни его жизни, чтоб, к примеру, спланировать пол ребенка или понимать необходимость подготовки к вынашиванию. Как происходит развитие плода при естественной беременности и какие этапы проходит эмбрион после переноса по дням в протоколе ЭКО?

Естественное оплодотворение

Развитие эмбриона от зачатия до рождения — достаточно сложный период, благополучие которого определяется первыми днями внутриутробной жизни. Оплодотворение играет большую роль в определении пола малыша, а последующий этап, на котором формируются ткани и органы ребенка определяет успешность развития плода.

Любая беременность начинается с середины менструального цикла, а именно с момента оплодотворения яйцеклетки, хотя в акушерстве принято считать началом беременности первый день после менструации. Зачатие происходит в день овуляции, так как способность яйцеклетки к продолжению рода теряется через 12-24 часа после разрыва фолликула.

При естественном процессе зарождения новой жизни, в фаллопиевой трубе после проникновения в яйцеклетку сперматозоида образуется диплоидная клетка, которая начинает делиться в геометрической прогрессии. На 4 день после оплодотворения в зиготе насчитывается 58 деленных клеток, 53 из которых станут основой для формирования тканей и внутренних органов ребенка, а другие 5 — примут участие в формировании плаценты, околоплодного пузыря и пуповины.

На 5 день зигота переходит в стадию бластоцисты, которая характеризуется наличием пузырька с жидкостью и последующим рассасыванием оболочки зиготы. На этом этапе зародыш начинает прибавлять в весе. На 7-10 дни после зачатия начинается имплантация эмбриона в матку.

 

Прикрепление эмбриона к матке — момент истины

От зачатия до имплантации, в зависимости от различных факторов, проходит 7-10 дней. Начало имплантации проходится к концу недели после зачатия, когда эмбрион, перемещаясь по маточным трубам, достигает полости матки.

В зависимости от состояния эндометрия, его толщины и упругости, процесс имплантации может занять больше времени, тогда могут диагностировать позднюю имплантацию. В норме процесс прикрепления плода занимает около 40 часов. Толщина эндометрия для прикрепления бластоцисты не должна быть меньше, чем 7 мм.

С первых часов после начала имплантации в организме женщины начинает вырабатываться специфический гормон ХГЧ, который посылает мозгу сигнал о начале беременности. Спустя 9-10 дней после предполагаемого зачатия можно проводить анализ крови на беременность.

Имплантация в 30% случаев может сопровождаться кровянистыми выделениями, и, почти всегда, локальными тянущими болями.

После имплантации эмбрион продолжает расти в эндометрии, который обеспечивает поставку необходимых питательных веществ до формирования плаценты.

Через 10 дней после зачатия наступает непосредственно беременность — плод уже закрепился и начинает свое формирование. Сразу после прикрепления плода эмбрион представляет собой три слоя клеток, из которых формируется кожа, внутренние органы и опорно-двигательная система.

На 14-20 дни после оплодотворения появляются зачатки пуповины и плаценты. В эти дни образуется первичная кровеносная система, околоплодный пузырь, увеличивается количество клеток, начинается формирование всех систем и органов ребенка.

Эмбрион на 5 неделе

С 18 по 21 день после зачатия у зародыша начинает биться сердце, что легко проследить с помощью ультразвукового исследования, параллельно на 20-22 день у малыша образуется основа скелета — хорда, спинной, головной мозг и его отделы. На 24-26 дни закладывается основа центральной нервной системы.

На 3 неделе после зачатия, с 21 по 30 дни у малыша формируются конечности, нервная трубка и висцеральные дуги. К концу 1 месяца у малыша четко просматривается мышечная ткань, зачатки глазных яблок, позвоночник. Дальнейший рост эмбриона предполагает развитие имеющихся зачатков.

С 5-й недели эмбрион переходит в стадию плода.

На 5 неделе с момента зачатия у малыша продолжают развиваться все системы и органы, особенно мозг. Начинают появляться первичные половые признаки ребенка. Продолжает

С 6 недели после зачатия у ребенка формируются уши, нос, глаза, веки, пальчики на руках и ногах. Сердце делится на камеры, формируются почки и мочеточники.

Как развивается эмбрион после переноса во время ЭКО

При экстракорпоральном оплодотворении, процесс зачатия немного иной, однако принцип все же сохраняется. Эмбрионы культивируются в так называемой пробирке и в первые 5 дней яйцеклетка трансформируется: сначала в зиготу (однодневный зародыш), затем в морулы, а после в бластомеры. Спустя 3 дня у яйцеклетки уже сформирован набор хромосом и половая принадлежность, и при наличии 10-16 бластомеров репродуктологи производят подсадку.

Таблица развития выглядит примерно так:

1 ДПП Бластомеры продолжают делиться.
2 ДПП Эмбрион выходит из оболочки и прикрепляется к тканям матки. При этом женщины отмечают ощущения первых признаков беременности.
3-5 ДПП Бластоциста приклеиватеся и внедряется в эндометрий, после чего эмбрион начинает питаться ресурсами материнского организма.
6 ДПП В этот день достаточно часто у будущей мамы наблюдается имплантационное кровотечение.
7 — 10 ДПП Формируется плацента, зачатки хориона, начинается интенсивный рост гормона ХГЧ.
11-12 ДПП В этот период уже можно сдать анализ либо сделать тест на беременность.

Во всем остальном, развитие эмбриона ничем не отличается от зачатия в естественном процессе. В данный период будущей маме необходимо позаботиться о себе, максимально снизить нагрузку, исключить половую жизнь и стрессы.

При недомоганиях не стоит лезть на форум и накручивать себя чужими неудачными историями, лучше обратиться к лечащему врачу.

Скрининг 1 триместра

Эмбрион на 7 неделе

На 7 неделе продолжают формироваться пуповина и плацента, через которые плод обеспечивается воздухом и пищей. Мозг к тому времени имеет четкое разграничение полушарий, заканчивается формирование пальчиков, ладошек ребенка, веки и глазки уже сформированы. Запускается эндокринная система.

На 8 неделе у плода появляются вкусовые рецепторы, формируется желудочно-кишечный тракт и ротовая полость. Совершенствуются очертания лица, у мальчиков формируются яички. Тело ребенка начинает удлиняться, а кости твердеют. К этому времени длина эмбриона равна 20 мм.

На 9-й неделе надпочечники малыша начинают вырабатывать гормоны, продолжает свое формирование кровеносная система, у мальчиков формируется предстательная железа. В крови на этом этапе есть эритроциты, хотя лейкоциты еще отсутствуют. У малыша уже сформированы суставы и мышечная система, потому пальчики, колени и локти уже могут сжиматься. Формирование органов на этом этапе прекращается, все силы беременной и малыша направлены на дальнейшее совершенствование систем.

На 10-й неделе после зачатия заканчивается первый триместр. Этот период в акушерстве равен 12 неделям беременности, так как отсчет начинается с первого дня последних месячных.

Первый скрининг рекомендуется проводить с первого дня 10-й недели и до 6 дня 13-й недели беременности с целью выявления возможных пороков развития и определения точного срока вынашивания. Наиболее точные результаты дает скрининг на 11-12 неделях.

В рамках первого из двух обязательных обследований беременной необходимо сдать кровь на уровень гормонов, резус-конфликт, инфекции и пройти УЗИ. На ультразвуковом исследовании оценивается длина плода и размеры головы, о симметричность развития полушарий мозга, состояние внутренних органов, величина костей, размеры сердца и животика. На обследовании врач сможет разглядеть и предупредить развитие патологий.

Итог

Развитие ребенка от зачатия до рождения процесс достаточно сложный и трудоемкий. Первый триместр является самым важным периодом гестации, так как в это время закладываются и формируются все системы малыша. В конце первого триместра проводится исследование, которое помогает отследить соответствие развития эмбриона сроку вынашивания и предупредить патологии. Для будущей мамы скрининг представляет собой возможность впервые увидеть малыша.

Первый снимок брюшной полости является одним из самых трогательных моментов беременности, а как думаете вы?

Что такое эмбриологический протокол и его расшифровка

Эмбриологический протокол

Оплодотворение методом ЭКО

Данная оценка осуществляется эмбриологом визуально. В этом случае нельзя со полной уверенность судить о зрелости ооцитов, так как для такого оплодотворения ооциты не очищаются от клеток кумулюса. Если ОКК выглядит плотным и темным, то он оценивается эмбриологом как «0». Если ОКК выглядит рыхлым и прозрачным, то он, как правило, содержит зрелый ооцит и получает оценку «1». Если на следующий день, после очистки ооцитов от клеток кумулюса и проверки оплодотворения, данный ооцит действительно был зрелым, то оценка выглядит как «1–1», если ооцит оказался не зрелым, то оценка будет «1–0».

Оплодотворение методом ИКСИ

Данная оценка проводится через час после получения ОКК, которые обрабатываются ферментом, чтобы отделить ооциты от лишних клеток. В этом случае эмбриолог с уверенностью может говорить о количестве зрелых (пригодных для оплодотворения) ооцитов.

  • Столбец 0 — это день пункции (день ноль).
  • ООК — означает ооцит‐кумулюсный комплекс.
  • MII — Зрелый ооцит
  • MI, GV — Не зрелые ооциты (для оплодотворения не подходят, ооциты стадии MI могут дозреть в чашке, но зиготы, полученные после такого оплодотворения, как правило, не дают хороших эмбрионов)
  • ABN — абнормальный ооцит (для оплодотворения не подходит. Может быть без оболочки, иметь включения в цитоплазме, неправильную форму и т.д. Может быть как зрелым так и не зрелым)
  • ATR — атретичный (дегенеративный) ооцит (для оплодотворения не подходит)

Только хорошие ооциты подходят для оплодотворения

Эмбриолог следит за действием буквально по часам, т.к возможны разные аномальные варианты развития, которые в клинике обязательно отслеживают и культивируют отдельно. Через 16–18 часов после проведения оплодотворения в ооците появятся специфические округлые структуры — пронуклеусы. Это предшественники ядер, содержащие генетический набор как мамы, так и папы.

Ооциты (NF, 1PN) откладываются в отдельныю капли и за ними также наблюдают. Если из такого ооцита получается отличный эмбрион, то вопрос о его переносе или заморозки решается совместное с репродуктологом, эмбриологом и пациентом.

Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение 6 дней.

  • 2PN — два пронуклеуса (нормальное оплодотворение). Именно такие эмбрионы культивируют дальше
  • NF – пронуклеусов нет. Оплодотворение либо наступило, но пронуклеусы слишком быстро исчезли, либо ооцит просто не оплодотворился
  • 1PN — один пронуклеус. В 25% случаев при 1PN эмбрион может быть диплоидным.
  • NS — ооцит не выжил после процедуры ИКСИ
  • 3PN и более — аномальный эмбрион. Перенос такого эмбриона запрещен, в клинике такие эмбрионы никогда не используют.

Одноступенчатые среды

Для культивирования эмбрионов в клинике используются передовые одноступенчатые среды, которые позволяют «оставить в покое» эмбрионы до 5го дня развития.

Через сутки эмбрион уже состоит из 6–8 бластомеров. До этого момента эмбрион развивался исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Однако если «генетическая программа», в которой закодированы этапы нормального развития эмбриона, содержит ошибки, эмбрион (4–19% случаев) останавливается в развитии не достигнув стадии бластоцисты — так называемый «блок развития». Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов.

Наиболее точная (эффективная) оценка эмбрионов происходит на стадии бластоцисты (5–6 день после оплодотворения). И если «лучшая» бластоциста выросла из «худшего» ооцита, максимальные шансы на успешное ЭКО будут все‐таки у нее. Поэтому, уважаемые пациенты, не стоит узнавать ежедневно судьбу каждого эмбриончика. Наберитесь терпения, скоро все станет предельно ясно!

Эмбриологи используют численно–буквенную систему оценки качества, где первая цифра означает количество бластомеров, буква их качество, а вторая цифра оценка фрагментации.

  • Тип A1 — эмбрион с равными бластомерами, отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (например, 4А1 — четырех клеточный «отличник»).
  • Тип В2 — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В2)
  • Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С3)
  • Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D4)

Классификация бластоцит

Столбец 5, 6 — день переноса и/или криоконсервации (день 5 и 6).

При классификации бластоцист в обозначении указывают цифру от 1 до 6 (степень развития эмбриона):

  1. полость бластоцисты меньше, чем половина целого эмбриона
  2. полость бластоцисты больше, чем половина целого эмбриона
  3. полная бластоциста, полость заполняет почти весь эмбрион
  4. развитая бластоциста, полость включает весь эмбрион, тонкая оболочка
  5. бластоциста пробивается из оболочки
  6. бластоциста без оболочки

Буквенное обозначение

Качество внутриклеточной массы, из которой будет развиваться зародыш:

  • A — много клеток, плотно упакованные
  • B — несколько клеток, свободно сгруппированные
  • C — очень немного клеток

Качество трофэктодермы (TE), которая обеспечит прикрепление эмбриона к эндометрию и разовьется в плаценту

  • A — много клеток, образуют единый слой
  • B — мало клеток, образуют свободный эпителий
  • C — очень мало крупных клеток

Развитие эмбриона по дням после переноса (Фото и Видео)

Запускается процесс компактизации – упрочняются межклеточные связи, поверхность клеток сглаживается. Проводится следующий этап оценки качества. Если существуют риски остановки развития на стадии морулы, принимается решение о возможности переноса ее в матку. Принято считать, что в организме женщины шансы выжить увеличиваются.

Развитие 3 дневных эмбрионов после подсадки в норме не отличается от того, если бы они продолжались культивироваться в среде.

На 4 день с момента оплодотворения процесс компактизации завершается, бластомеры разделены на две группы – клеточную массу и трофобласт. Первая из них даст развитие всем органам и тканям, из другой сформируются внезародышевые оболочки – хорион, амнион, аллантоис, желточный мешок, трофобласт также сыграет решающую роль в момент имплантации.

Бластоциста. Внутри морулы с моментом разделения бластомеров на группы появляется полость. Когда она достигает половину ее размера, зародыш называется уже бластоцистой. Шансы на выживание выше у тех бластоцист, у которых полость больше и лучше сформированы обе группы бластомеров.

Затем развитие 5 дневного эмбриона продолжается по схеме – полость увеличивается, прозрачная оболочка растягивается и разрывается (хетчинг). Теперь бластоциста готова к имплантации. Проводится пересадка в матку. Далее начинается развитие эмбриона по дням после переноса 5 дневок.

Гаструла. На 6-7 день после оплодотворения яйцеклетки, или на 3-4 ДПП 3-х дневок, или на 1-2 ДПП 5-ти дневок начинается процесс имплантации. Бластоциста прилипает к слизистой оболочке, трофобласт начинает образовывать ворсинки, которые помогают проникать глубже в эндометрий.

Ближе к 9 дню ПО процесс имплантации полностью заканчивается, эмбрион полностью погружается в матку. Далее запускается сложный механизм образования плаценты, формирования будущих органов зародыша, внезародышевых оболочек, начинается продуцирование гормона ХГЧ. С каждым днем его уровень растет и на 14 день после оплодотворения иногда можно диагностировать беременность. Теперь зародыш полноценно называется эмбрионом.

Важная информация по развитию зародышей

Что происходит с эмбрионом после переноса в матку по дням? При отсутствии негативных факторов, с каждым днем зародыш благополучно развивается. Если на любом этапе случается отклонения в геноме, сказывается воздействие искусственной среды для культивирования или в организме женщины наличиваются процессы, препятствующие его росту, то шансы на выживание малы, в матке происходит «естественный отбор».

Как развивается эмбрион после переноса в матку по дням? В случае если был подсажен 3-х дневный зародыш, то логично, что он, прежде всего, достигает стадии бластоцисты. После чего развитие эмбриона после переноса в матку по дням имеет одинаковую схему для всех.

Развитие эмбриона после ЭКО

Этапы ЭКО

Экстракорпоральному оплодотворению предшествует всестороннее обследование будущих родителей. Только после того, как установлены показания и исключены противопоказания для выполнения искусственного оплодотворения, начинают готовиться к процедуре в соответствии с протоколом ЭКО.

Вначале готовят женщину. Врачи назначают ей гормональную стимуляцию овогенеза. За ростом фолликула наблюдают с помощью УЗИ. Как только доминантный фолликул созреет, производят при помощи специальной иглы его пункцию. В шприц забирают фолликулярную жидкость вместе с яйцеклеткой и помещают в чашку Петри, где находится специальная питательная среда.

Следующий этап ЭКО – это получение мужских половых клеток. При нормальных показателях спермограммы мужчины семенную жидкость получают путём мастурбации и собирают в специальный контейнер. Если же анализ спермы показал, что в ней мало сперматозоидов или же у них нарушена морфология, забор генетического материала производят оперативным путём из яичка или же при помощи пункции семявыносящих путей. Сперму подмешивают к фолликулярной жидкости и ожидают, когда сперматозоиды оплодотворят самостоятельно яйцеклетку.

На этом этапе ЭКО эмбрион может образоваться и другим путём. В том случае, когда в эякуляте недостаточное количество сперматозоидов, выполняют ИКСИ – наиболее жизнеспособную мужскую половую клетку вводят непосредственно в яйцеклетку под микроскопом при помощи специальных инструментов. И в том, и в другом случае оплодотворённые ооциты помещают в термостат, в котором поддерживается стабильная температура и влажность. Там эмбрион ЭКО развивается до третьего или пятого дня.

Процесс развития эмбриона ЭКО in vitro (вне организма женщины) выглядит так:

  • На второй день: путем слияния женского и мужского геномов происходит образование зиготы. Эмбрион ЭКО начинает делиться, и его качество оценивают по фрагментации, форме и размеру.
  • На третий день видно, что эмбрион состоит из четырёх или восьми дочерних клеток (бластомеров).
  • Четырёхдневный эмбрион ЭКО состоит не менее чем из десяти бластомеров, но идеальный вариант – когда их шестнадцать. В это время поверхность эмбриона уже становится более гладкой, поскольку в нём происходит процесс компактизации. На этой стадии развития он называется морулой.
  • В последующие два дня эмбрион называется бластоцистой. Она состоит из двух видов делящихся клеток. На этом этапе бластоциста покрыта блестящей оболочкой. Это покрытие разрывается, и только после этого полноценный эмбрион способен к имплантации.

Очередным этапом протокола ЭКО является перенос эмбриона в полость матки. Этому моменту иногда предшествует генетический скрининг, который необходим в случае подозрения на мутацию генов у родителей. Тогда осуществляют перенос эмбриона ЭКО, в котором не выявлено генетической патологии.

Эмбрионы ЭКО переносят в полость матки при помощи специального шприца. Они должны имплантироваться к стенке матки. Этот процесс контролируют при помощи анализа крови на содержание хорионического гормона человека. Как только уровень ХГЧ в крови женщины начинает повышаться, можно полагать, что беременность наступила.


Эмбрион ЭКО. Развитие после переноса

Когда бластоциста выходит из своей оболочки, этот процесс называется «хетчинг». Он происходит на седьмые сутки развития эмбриона. Только после хетчинга он способен имплантироваться в эндометрий.

Развитие эмбриона по неделям сумел зафиксировать при помощи мощного объектива фотограф Леннарт Нильсон в шестидесятых годах прошлого столетия. Это процесс, по сути, одинаково происходит и при естественном зачатии, и после ЭКО. Некоторые различия существуют лишь на начальном этапе.

Известны такие основные стадии развития эмбриона ЭКО в первом триместре беременности:


1. Процесс имплантации происходит на седьмые сутки после оплодотворения яйцеклетки и продолжается на протяжении сорока часов.
2. Бластула, которая состоит из одного слоя клеток, превращается в гаструлу. У гаструлы есть три слоя, которые являются исходным материалом для образования в последующем кожи, желудочно-кишечного тракта и внутренних органов, а также опорно-двигательной системы.
3. Происходит образование зачатков пищеварительной, выделительной, дыхательной и нервной системы (нервной трубки). Закладывается сердце, начинает формироваться из хориона плацента.
4. Происходит формирование головного и спинного мозга из нервной трубки. Затем появляются зачатки глаз, ног и рук, начинается сосудистый кровоток, и фиксируются первые сокращения сердца.
5. Начинают формироваться органы пищеварительной, кровеносной, половой и дыхательной систем. В это же время начинается образование пуповины, а также появляются органы чувств. На лице видны полости рта и носа.
6. Глаза приобретают цвет, плод начинает двигаться. В это время завершается разделение сердечка на камеры и помощью специальной диагностической аппаратуры можно услышать сердцебиение.
7. В первом триместре заканчивается процесс образования плаценты, зарастают жаберные щели и начинают формироваться лёгкие. Хорошо развиты глаза и сердце.
8. Почки начинают фильтровать мочу, интенсивно растут все четыре конечности. Заканчивается процесс образования всех жизненно важных органов. Лицо плода всё более похожее на человеческое.
9. Плод начинает более активно двигаться. На пальцах его рук и ног образуются суставы. В это время продолжается рост головного мозга, появляются голосовые связки, а также совершенствуется эндокринная система.
10. К концу первого триместра заканчивает формироваться дыхательная система, а тело приобретает нормальные пропорции, тем не менее, голова все ещё достаточно велика. В соответствии с половой принадлежностью развиваются наружные половые органы.
11. На теле и голове образуются тонкие волоски, начинается формирование костей. Малыш начинает более активно двигаться и начинает класть палец в рот.
12. Вырабатывается секрет поджелудочной железой, в кишечнике появляется меконий.

Для второго триместра характерно то, что у малыша появляются брови и ресницы, он может выполнять мимические движения. В это время укрепляется его костно-мышечная система. При помощи акушерского стетоскопа можно услышать сердцебиение плода. Поджелудочная железа начинает продуцировать инсулин. У мальчиков образуется важный орган – предстательная железа.

С шестнадцатую по девятнадцатую неделю беременности у плода на пальчиках появляются ногти, усовершенствуются органы чувств, начинают слышать уши, а глаза – различать свет. Становится ощутимым шевеление плода, усовершенствуется состав крови. С двадцатой по двадцать пятую неделю развития эмбрион ЭКО начинает лучше координировать движения, шевеление плода чувствуют почти все женщины.

Развитие эмбриона после ЭКО продолжается в третьем триместре. С двадцать шестой по тридцатую неделю в лёгких заканчивается процесс формирования альвеол. Они вырабатывают сурфактант – вещество, необходимое для сохранения формы лёгких. Малыш уже начинает активно реагировать на громкие звуки, он может моргать. Развитие головного мозга происходит быстрыми темпами. Кожа плода приобретает упругость, начинает формироваться жировая ткань.

В период времени с тридцатой по тридцать восьмую неделю ребёнок продолжает набирать вес, его кожа становится гладкой, совершенствуется работа внутренних органов. Ребёнок ближе к моменту родов меняет положение, в большинстве случаев переворачивается головой вниз.

О том, правильно ли развивается эмбрион ЭКО, можно при помощи измерения его роста и веса. Отслеживать эти критерии позволяет ультразвуковое исследование. Косвенно о них можно судить, анализируя результаты стандартных измерений окружности живота и размеров матки. Врач их сравнивает с усреднёнными результатами, зафиксированными в специальной таблице.

Если вы планируете выполнить ЭКО, обращайтесь в клинику «Центр ЭКО» Архангельск. А с помощью современных методов исследований вы сможете вместе с нами наблюдать за развитием вашего малыша после ЭКО.


Эмбриональное развитие, день за днем ​​

Неоплодотворенное яйцо : Зародышевый диск стерильного яйца имеет скопление белого вещества в центре
Оплодотворенная яйцеклетка : Оплодотворенный эмбриональный диск выглядит как кольцо: он имеет центральную область, более светлую по цвету, в которой находится эмбрион.

День 1 : Зародышевый диск находится на стадии бластодермы. Полость сегментации под блестящей областью приобретает форму темного кольца.

День 2 : Появление первой борозды в центре бластодермы.Среди внезародышевых придатков появление желточной оболочки, которая будет играть главную роль в питании эмбриона.

День 3 : Эмбрион лежит на левом боку. Начало кровообращения. Желточная оболочка распространяется по поверхности желтка. Можно различить голову и туловище, а также мозг. Внешний вид сердечных структур, которые начинают биться.

День 4 : Развитие амниотической полости, которая будет окружать эмбрион: наполненная амниотической жидкостью, она защищает эмбрион и позволяет ему двигаться.Внешний вид аллантоисного пузырька: он играет важную роль в резорбции кальция, дыхании и накоплении отходов.

День 5 : Заметное увеличение размера эмбриона; зародыш принимает С-образную форму: голова сближается с хвостом. Разгибание конечностей. Дифференциация пальцев нижних конечностей.

День 6 : Желточная оболочка продолжает расти и теперь окружает более половины желтка. Трещина между первым, вторым и третьим пальцами верхних конечностей и между вторым и третьим пальцами нижних конечностей.Второй палец длиннее остальных.

День 7 : Истончение шеи, которая теперь четко отделяет голову от тела. Формирование клюва. Мозг постепенно входит в цефалическую область: он постепенно уменьшается пропорционально размеру эмбриона.

День 8 : Желточная оболочка покрывает почти весь желток. Пигментация глаз хорошо заметна. Верхняя и нижняя части клюва дифференцированы, а также крылья и ноги.Шея вытягивается и мозг полностью обосновывается в ее полости. Открытие наружного слухового прохода.

День 9 : Появление когтей. Бутонизация первых перьевых фолликулов. Рост аллантоиса и усиление васкуляризации желточного тела.

День 10 : Ноздри представлены в виде узких отверстий. Рост век. Разгибание дистальных отделов конечностей. Желточная оболочка полностью окружает желток. Перьевые фолликулы теперь покрывают нижнюю часть конечностей.Внешний вид яйцезуба.

День 11 : Глазное отверстие имеет эллиптическую форму, которая становится тоньше. Аллантоис достигает своего максимального размера, а желточный зев начинает сокращаться. Эмбрион теперь имеет вид цыпленка.

День 12 : Перистые фолликулы окружают наружный слуховой проход и покрывают верхнее веко. Нижнее веко покрывает две трети или даже три четверти роговицы.

День 13 : Аллантоис сжимается, превращаясь в хориоаллантоисную мембрану.Появление когтей и чешуи на ногах.

День 14 : Пух покрывает почти все тело и быстро растет.

День 15 и 16 : Небольшие морфологические изменения: цыпленок и пух продолжают расти. Сокращение желтка ускоряется. Прогрессирующее исчезновение яичного белка. Голова движется в сторону проклевывания под правым крылом.

День 17 : Почечная система эмбриона вырабатывает ураты. Клюв, который находится под правым крылом, указывает на воздушную камеру.Яичный белок полностью резорбируется.

День 18 : Начало интернализации желтка. Уменьшение количества амниотической жидкости. Это время перевода из инкубатора в выводной шкаф, а также, возможно, вакцинации in ovo.

День 19 : Ускорение резорбции желтка. Клюв упирается во внутреннюю оболочку раковины, готовый ее проткнуть.

День 20 : Желточник полностью резорбирован; закрытие пупка. Птенец прокалывает внутреннюю оболочку скорлупы и дышит в воздушной камере.Газообмен происходит через скорлупу, которая является пористой. Птенец готов вылупиться. Начинается прокалывание оболочки.

День 21 : Цыпленок использует свое крыло в качестве направляющей и свои ноги, чтобы поворачиваться и протыкать скорлупу по кругу с помощью своего яичного зуба.

Высвобождается из скорлупы через 12-18 часов и дает высохнуть пуху.

Полевой определитель стадий развития морских черепах (Cheloniidae) с примечаниями о развитии Dermochelys

Самые ранние описания эмбрионов морских черепах были сделаны на основе образцов, случайно собранных для иллюстрации конкретных аспектов развития.Например, для Eretmochelys imbricata (Voeltzkow 1903; Fuchs 1915; Deraniyagala 1939) были описаны и проиллюстрированы эмбрионы, полученные в разные сроки развития, Chelonia mydas (Parker 1880; Deraniyagala 1939; Penyapol 1958; Domantay 9068), Caretta (Agassiz 1857; Mitsukuri 1894, 1896-1898; Иордан 1917; Fujiwara 1966; Kondo 1986; Kuratani 1999), Lepidochelys Olivacea (Deraniyagala 1939) и Dermouchelys Coracea (Deraniyagala 1933, 1939, 1953) как часть самых разных исследований.Агассис (1857), Мицукури (1894, 1896–1898) и Фудзивара (1966, 1971) исследовали аспекты развития яйцекладки. Рейно и др. (1980) сосредоточились на проекциях эпителия жаберных дуг кожистых черепах ( D. coriacea ). Kuratani (1999) описал развитие хондрокраниума у ​​ эмбрионов C. caretta . Биллетт и др. (1992) использовали сканирующую электронную микроскопию для улучшения описания эмбрионов C. caretta . Ни одно из этих исследований не дало полной последовательности развития какого-либо вида морских черепах.

Первая стандартная последовательность развития морской черепахи от яйцекладки до вылупления была получена Crastz (1982) для L. olivacea . Миллер (1985b) объединил описания эмбрионов Cheloniidae, чтобы определить стадии развития от оплодотворения до появления всходов для всех видов морских черепах. Совсем недавно Каска и Дауни (1999) использовали постовипозиционные стадии Миллера для описания эмбрионов зеленых и головастых черепах в Средиземноморье. Эмбриональное развитие кожистой спины было подробно описано Renous et al.(1989) на основе Миллера (1985b). Аль-Мухайни и др. (2010) использовали определения Миллера в качестве основы для описания развития эмбрионов зеленых черепах при 30°C.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ КЛЮЧА СТАДИРОВАНИЯ

Таблицы стадирования содержат описание онтогенетических изменений эмбрионов, инкубируемых в определенных условиях (Hamburger and Hamilton 1951; Ewert 1985; Miller 1985a; Hopwood 2007), которые можно использовать для оценки развития в различных условиях, такие как естественные, экспериментальные и неизвестные (например,g., C. caretta , Özdemir et al. 2008 г.; Carettochelys insculpta , Beggs et al. 2000 г.; Crocodylus porosus , Magnusson and Taylor 1980; Уэбб и др. 1983).

Эмбриональное развитие происходит в сложных условиях гнездового пляжа (Ackerman 1997). В результате выбор места для гнезда оказывает значительное влияние на инкубацию, поскольку среда, в которой находятся развивающиеся эмбрионы, зависит от места, выбранного гнездящейся самкой (Mortimer 1982; Wood and Bjorndal 2000; Miller et al.2003 г.; Серафини и др. 2009). Физические характеристики субстрата обеспечивают тепло- и гидроизоляцию и газообмен между окружающей средой и развивающимися эмбрионами в гнезде (Мортимер, 1990; Акерман, 1997; Хевависенти и Парментер, 2002; Акерман и Лотт, 2004).

Оценка в полевых условиях стадии и времени инкубации, когда эмбрионы погибли, может помочь выявить факторы смертности, такие как затопление подпеском (Caut et al. 2010), чрезмерное количество осадков (Ragotzkie 1959), затопление (Foley et al.2006), разрушение яйцевых камер во время проклевывания и вылупления детенышей (Mortimer 1990) и экстремальные температуры (Valverde et al. 2010), которые влияют на выживание эмбрионов на гнездовом пляже. Здесь мы представляем упрощенный ключ к стадиям развития морских черепах, который в сочетании со знанием температуры пляжа и/или продолжительности инкубации помогает установить, когда произошла смертность, тем самым помогая определить факторы смертности.

МЕТОДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЮЧА

Миллер (1985b) определил 31 стадию развития эмбрионов морских черепах, из которых стадии 1–5 происходят внутри яйцевода самки, а стадии 6–31 происходят в гнезде после откладки яиц.Пять предовипозиционных стадий, описанных Миллером (1985b), не включены в ключ. Для стадий 6–31 в ключе представлены только те внешние морфологические признаки, которые видны невооруженным глазом или с помощью наручной линзы ×10 и карманного фонаря. Первоначальные описания стадий были составлены на основе изучения нескольких особей каждого вида, инкубированных в естественных и контролируемых условиях (Miller, 1982, 1985b). Описания признаков, относящиеся только к одному виду, были заменены общими, которые помещают образец на соответствующую стадию независимо от вида.Чертежи сделаны по образцам и фотографиям. Объем зародышей и их желтков определяли по вытеснению воды в мерном цилиндре (± 2,5 см3). Измерения проводились штангенциркулем (± 0,1 мм) на свежих и консервированных образцах.

Яйца собирали при откладке яиц и перемещали в защищенную зону инкубатория или в инкубаторы (температуры: 26°C ± 0,5°C, 29°C ± 0,5°C, 32°C ± 0,5°C). Большинство из них были перемещены в течение 1 часа (Limpus et al., 1979). Яйца C. mydas , Natator depressus , C.caretta и D. coriacea инкубировали как в лабораторных, так и в пляжных условиях; яйца других видов инкубировались в инкубаториях на пляже (Miller, 1982). Изученные эмбриона L. olivacea представляли собой невылупившиеся остатки образовавшихся кладок; эти образцы сравнивали с описаниями Crastz (1982) для определения соответствующих стадий.

В следующем ключе хронология стадий дана в процентах от времени развития на основе яиц, инкубированных при 29°C.Несмотря на то, что не указывается точное время возникновения стадии, использование процентного соотношения учитывает изменение продолжительности развития при различных температурах в полевых условиях. Использование 29°C в качестве исходного уровня оправдано, поскольку эта температура 1) близка к середине пределов эмбриональной толерантности (Ackerman 1997) и 2) близка к центральной температуре для половой дифференциации для большинства видов (за исключением Lepidochelys ) ( Виббельс 2003).

Измерения специфических характеристик представлены по видам, чтобы усилить определение стадии.Общая длина диска измерялась как расстояние по прямой между передней и задней частями зародышевого диска; длину от макушки до крестца измеряли как расстояние по прямой от вершины завитого эмбриона до завитка у основания хвоста. Длину передних конечностей измеряли как расстояние по прямой между проксимальным и дистальным концами ласт кисти развивающегося эмбриона. Длина прямого панциря измерялась как расстояние по прямой между передним и задним концами панциря развивающегося эмбриона.Ширину панциря по прямой измеряли как расстояние по прямой через панцирь развивающегося эмбриона. Расстояние между когтями измеряли как расстояние по прямой между когтями переднего ласта. Время развития определяется как интервал от яйцекладки до проклевывания. Проклевывание происходит, когда эмбрион разрывает яичную скорлупу. Вылупление происходит, когда эмбрион выходит из яичной скорлупы. Появление определяется как появление детеныша на поверхности пляжа.

РЕЗУЛЬТАТЫ: КЛЮЧ

Следующий дихотомический ключ к стадиям развития Cheloniidae (и вообще к развитию Dermochelys ) (рис.1 и 2) основан на стадиях развития, определенных Миллером (1985b), с использованием эмбрионов C. mydas ( n  = 733), N. depressus ( n  = 375), C. 509 caretta 9094. ( N = 1303), Eretmocheleys Imbricata ( N = 567), L. Olivacea ( N = 51) и Dermochleys Coracea ( N = 96) (Miller 1985B).

Рисунок 1.

Иллюстрации эмбриональных стадий морских черепах на основе определений стадий развития Миллера (1985b).DT (время развития)  = время от яйцекладки до проклевывания. Стрелки указывают ключевые характеристики. Bar = 1 мм: этапы 6–20; 5 мм: этапы 21–24; 10 мм: этапы 25–31.

Рисунок 2.

Стадии развития 23–30 эмбрионов D. coriacea на основе Miller (1985b). Стрелки указывают ключевые характеристики. Бар = 10 мм: этапы 23–30.

Дихотомический ключ к эмбриональным стадиям морских черепах, когда яйца были извлечены из гнезда на берегу или в других условиях инкубации
(на основе определений стадий развития, предложенных Miller 1985b.%DT [время развития] = % времени инкубации от яйцекладки до проклевывания для яиц, инкубированных при 29°C.)

 1a. Эмбрион черепахи с пигментом на панцире23

 1a. Эмбрион без пигментированного панциря2

 2a. Эмбрион с плоско скрученными по бокам тела конечностями и с пигментацией радужной оболочки21

 2b. Эмбрион, отличный от указанного выше3

 3a. Эмбрион с определенной головой и глазами и с латерально выступающими зачатками конечностей17

 3b.Эмбрион, отличный от указанного выше4

 4a. Эмбрион большей частью дискообразный, без глазных выпуклостей5

 4b. Эмбрион удлиненный с отчетливыми глазными выпуклостями13

 5а. Бластопор в виде поперечной щели или широкого, открывающегося вперед полумесяца Стадия 6 яйцекладки [0,5 ± 0,5 %DT]

 5b. Эмбриональная зона не такая, как указано выше6

 6а. Бластопор в виде открывающегося назад полумесяца Стадия 7 [1,2 ± 0,5 %DT]

 6b. Эмбриональная зона не такая, как указано выше7

 7a.Бластопор в форме перевернутой буквы «U»; показана складка головы Стадия 8 [2,8 ± 0,5 %DT]

 7b. Эмбриональная зона не такая, как указано выше8

 8а. Бластопор в форме перевернутой буквы «U»; головная складка в виде открывающегося назад полумесяца; нет сомитов Стадия 9 [3,8 ± 0,5 %DT]

 8b. Не так, как указано выше9

 9a. Присутствуют 2 или 3 пары сомитов; нервные гребни соприкасаются на заднем конце головы Стадия 10 [4,8 ± 0,5 %DT]

 9b. Наличие более 4 пар сомитов10

10a.Присутствуют 5 или 6 пар сомитов; нервные гребни соприкасаются или сливаются вдоль средней линии головы Стадия 11 [5,7 ± 0,5 %DT]

10b. Присутствует более 6 пар сомитов11

11a. Имеется 8–10 пар сомитов; амнион занимает около половины общей длины Стадия 12 [6,7 ± 0,5 %DT]

11b. Присутствует более 11 пар сомитов12

12a. Имеется 12–14 пар сомитов; нейроцентрический канал ограничен сзади невысоким гребнем; амнион покрывает примерно три четверти общей длины Стадия 13 [7.6 ± 0,5 %DT]

12b. Присутствует более 14 пар сомитов13

13a. Имеется 15–17 пар сомитов; рот не открыт; амнион покрывает нейроцентрический канал Стадия 14 [8,6 ± 0,5 %DT]

13b. Присутствует более 17 пар сомитов14

14a. Имеется 19–21 пара сомитов; рот открыт как глубокая буква «V»; первая глоточная расщелина открыта; задняя амниональная труба сформирована Стадия 15 [11,5 ± 1 %DT]

14b. Присутствует более 21 пары сомитов15

15a.Имеется 23–25 пар сомитов; хрусталик в глазу дифференцирован, глоточные щели 1 и 2 открыты; небольшие зачатки конечностей видны на боковой стенке тела Стадия 16 [13,4 ± 1 %DT]

15b. Присутствует более 26 пар сомитов16

16a. Присутствуют 29–34 пары сомитов; зачатки конечностей выпячиваются латеро-назад; открыты все щели глотки Стадия 17 [16,3 ± 1 %DT]

16b. Присутствует более 35 пар сомитов17

17a. Имеется 35–40 пар сомитов; пальцевые пластины не свободны от стенки тела; лоскуты сформировались на передних краях всех щелей глотки Стадия 18 [19.2 ± 1 %DT]

17b. Присутствует более 40 пар сомитов18

18a. Имеется 40–45 пар сомитов; пальцевые пластины свободны от стенки тела и выступают латерально Стадия 19 [22,0 ± 1 %DT]

18b. Присутствует более 45 пар сомитов19

19a. Цифровые пластины частично или полностью прижаты к стенке тела; радужка непигментированная; расщелины глотки почти закрыты Стадия 20 [25,0 ± 1 %DT]

19b. Не так, как указано выше20

20a.Радужка по заднему краю пигментирована; зачаток панциря представляет собой валик на боковой стенке тела и заходит выше основания конечностей; цифровые пластины без зазубрин; пальцевая пластинка не отделена от лимба гребнем Стадия 21 [29,5 ± 1 %DT]

20b. Не так, как указано выше21

21a. Дистальный гребень определяет границу конечности от пальцевой пластинки; краевой гребень панциря отмечен маленькими низкими зазубринами; расщелины глотки закрыты Стадия 22 [34,5 ± 1 %DT]

21b.Не так, как указано выше22

22a. Задний край карапакса завершается по крайней мере невысоким валиком; передняя граница неполная; присутствуют пальцевые зазубрины, обозначенные как неглубокие гребни и бороздки Стадия 23 [39,4 ± 1 %DT]

22b. Не так, как указано выше23

23a. Передняя граница панциря обозначена по крайней мере невысоким гребнем на шее; определяется задняя граница подмаргинальной области; передний нет; указаны щитки панциря; на панцире могут быть пятна пигментации; пальцевые зубцы представлены в виде гребней и борозд. Стадия 24 [45,0 ± 1 %DT]

23b. Не так, как указано выше24

24a. Периферия панциря спереди и сзади полная; все щитки дифференцировались; чешуя тела и ласт недифференцированная; могут быть указаны шкалы мечения; пальцевые зубцы удлиняются; зачаток когтя имеется Стадия 25 [53,0 ± 2 %DT]

24b. Не так, как указано выше25

25a. Щитки панциря пигментируются; чешуя на голове, за исключением надушной, и кожные сосочки присутствуют; присутствуют все чешуйки ласт; верхушки чешуек могут быть пигментированы; имеются весы для маркировки Stage 26 [62.0 ± 2 %DT]

25б. Не так, как указано выше26

26a. Непигментированные чешуйки в области ушей, за исключением пигментированных у ястребов; все чешуйки ласт присутствуют и пигментированы; поперечная пластрональная складка обозначена изгибом, перпендикулярным оси тела; объем желтка больше, чем у образца Стадия 27 [70,6 ± 2 %DT]

26b. Не так, как указано выше27

27a. Чешуя над ушами пигментированная; поперечная пластрональная складка образует косой угол между брюшным и грудным щитками; объем пробы примерно равен объему желтка Стадия 28 [78.3 ± 2 %DT]

27б. Не так, как указано выше28

28a. Поперечная пластрональная складка образует острый угол; подмаргинальные щитки образуют бороздку; присутствуют пигментация и морфология детенышей; объем образца больше объема желтка в соотношении от 1,5 до 4:1. Стадия 29 [86,0 ± 2 %DT]

28b. Не так, как указано выше29

29a. Оставшаяся желточная масса покрыта пигментированной оболочкой; подкраевые щитки свернуты возле пластрона; масса желтка менее половины объема необработанного образца Стадия 30 [94.7 ± 2 %DT]

29б. Эмбрион, выколотый как минимум с передними плавниками из яичной скорлупы30

30a. Эмбрион проколот; желточная масса большей частью втянута в брюшную полость; поперечная пластрональная складка образует острый угол; влажные мембраны все еще прикреплены; образец не готов к всплыванию Стадия 31a [100 ± 2 %DT]

30b. Эмбрион из яичной скорлупы; желточная масса отсутствует; поперечная пластрональная складка образует косой угол или почти отсутствует; любые прикрепленные мембраны кажутся истертыми; образец готов к выходу Стадия 31b [102 ± 2 %DT]

Хотя стадии развития дискретны и разделены недвусмысленными изменениями в морфологии, развитие представляет собой непрерывный процесс, и особи могут проявлять признаки, промежуточные между двумя стадиями.В этих случаях добавление + к номеру стадии, указывающее на то, что эмбрион демонстрирует более продвинутый набор характеристик, чем описание стадии, помогает лучше определить положение образца в последовательности развития (например, стадия 16+ указывает на образец, который демонстрирует 26 пар сомитов, но имеет только 2 открытые глоточные щели). Там, где требуется конкретная стадия, ключ следует использовать в сочетании с подробным описанием Миллера (1985b) для определения стадии развития.

Первая группа постовипозиционных стадий (6–10) определялась изменением формы бластопора и дифференцировкой хорды, нервных складок и головных складок (рис. 1). Стадии 11–22 определялись количеством сомитов, дифференцировкой головы, пигментацией глаз и глоточными расщелинами. Более поздние стадии (23–31) определялись формированием панциря, развитием пигментации и чешуи, изменением объема зародыша по отношению к объему желтка (табл. 1).

Таблица 1.

Взаимосвязь объема эмбриона и объема желтка у эмбрионов морских черепах поздних стадий, инкубированных при 29°C.

Интервал между средним временем стадии 6 (яйцекладка) и стадией 7 может превышать 18 часов, потому что икра должна уравновеситься до температуры песка и выйти из яйцеводной диапаузы (сенсу предяйцекладная остановка; Rafferty and Reina 2012). Для яиц, инкубированных при 29°С, среднее время стадий 7 и 8 отличается примерно на 10 часов.Средние интервалы между 8-й и 12-й стадиями были короткими, примерно по 6–8 часов каждая. Между стадиями 12 и 14 имелись однодневные (24-часовые) интервалы. Между стадиями 14 и 19 средний интервал увеличился до 1,5 дня; этапы 19–24 разделены интервалами в 2 дня. Для стадий 24–30 средний интервал между средними временами стадий был чуть более 4 сут (4,2 сут). Сумма этих интервалов равнялась 50 дням эмбрионального развития. Интервал между разрывом (проклевыванием) и выходом из яичной скорлупы составлял от 1.5 и 5,6 сут и менялись в зависимости от температуры (табл. 2). Выкапывание гнездовой камеры для выхода на поверхность пляжа зависит от температуры (таблица 3) и может потребовать дополнительных 1–7 или более дней (Christens, 1990; Godfrey and Mrosovsky, 1997; Houghton and Hays, 2001; Koch et al. 2008). . В целом этот график предполагает, что детеныши должны появиться на пляже примерно через 55 дней (диапазон 51–59 дней) после откладки яиц, инкубированных при 29°C.

Таблица 2.

Количество дней, прошедших от первого до последнего вылупления яиц, инкубированных при разных температурах (см. также Christens 1990; Godfrey and Mrosovsky 1997; Houghton and Hays 2001; Koch et al.2008). SD = стандартное отклонение; df = степени свободы. NS =  не имеет значения.

Таблица 3.

Продолжительность инкубации яиц 3-х видов морских черепах при 3-х разных постоянных температурах. Градусо-дни равны разнице в средних днях, деленной на разницу в градусах.

Сроки возникновения стадии внутри эмбриональной последовательности зависели от температуры в процессе развития (рис. 3; табл. 3). При 26°C средняя продолжительность инкубации до появления всходов для 3 видов (77.9 г) был на 23,2 дня дольше, чем при 29°С, что на 7,7 дня больше, чем при 32°С. Продолжительность инкубации сокращалась на 2,6 дня на каждый градус между 29°С и 32°С, тогда как продолжительность сокращалась на 7,7 дня на каждый градус между 26°С и 29°С.

Рисунок 3.

Ожидаемое количество дней инкубации через проклевывание для достижения середины определенной стадии развития при 26°C (ромбы), 29°C (квадраты) и 32°C (треугольники). Требуется дополнительное время, чтобы детеныш появился на поверхности пляжа.

Измерения эмбрионов (таблицы 4–7) можно использовать для подтверждения стадии развития, определенной с помощью ключа. Общая длина диска (Таблица 4) является первой измеримой характеристикой эмбрионов ранних стадий (стадии 6-10). Средняя общая длина дисков зародышей 4 видов составляет около 0,2 см. Длина от макушки до крестца (таблица 4) стала измеримой по мере развития складки головы (стадия 11) и продолжала быть полезной на стадии 20. Передние конечности (таблица 5) начали достаточно дифференцироваться, чтобы ее можно было измерить на стадии 18; он продолжал быть полезным в качестве подтверждения стадии до стадии 30, после чего ее длина не изменилась.Длина прямого карапакса (табл. 6) стала измеряться на стадии 23, когда был указан задний край карапакса; он был полезен после образования переднего края панциря над шеей (стадия 24) в качестве подтверждения стадии до стадии 28, после которой его длина не изменилась из-за эмбриональной кривизны, вызванной яичной скорлупой.

Таблица 4.

Измерения некоторых эмбриональных характеристик: общая длина диска (мм) и длина от макушки до крестца (мм). Этапы от Миллера (1985b); измерения по Миллеру (1982).Общая длина диска измерялась как расстояние по прямой между передней и задней частями зародышевого диска; длину от макушки до крестца измеряли как расстояние по прямой от верхней части головы свернувшегося эмбриона до завитка у основания хвоста. SD = стандартное отклонение.

Таблица 5.

Измерения некоторых эмбриональных характеристик: длина передних конечностей (мм). Этапы от Миллера (1985b); измерения по Миллеру (1982). Длину передних конечностей измеряли как расстояние по прямой между проксимальным и дистальным концами ласт кисти развивающегося эмбриона.SD = стандартное отклонение.

Таблица 6.

Измерения некоторых эмбриональных характеристик: длина прямого панциря (мм). Этапы от Миллера (1985b); измерения по Миллеру (1982). Длина прямого панциря измерялась как расстояние по прямой между передним и задним концами панциря развивающегося эмбриона. SD = стандартное отклонение.

Таблица 7.

Избранные измерения для кожистых эмбрионов D. coriacea на более поздних стадиях развития. Этапы от Миллера (1985b); измерения по Миллеру (1982).Длина прямого панциря измерялась как расстояние по прямой между передним и задним концами панциря развивающегося эмбриона. Ширину панциря по прямой измеряли как расстояние по прямой через панцирь развивающегося эмбриона. Длину передних конечностей измеряли как расстояние по прямой между проксимальным и дистальным концами ласт кисти развивающегося эмбриона.

Измерения эмбрионов плоскоспинных и зеленых черепах (таблицы 4–6) можно использовать в качестве общего показателя для оценки стадии молодых кожистых эмбрионов на стадиях 6–22, поскольку эти эмбрионы крупнее эмбрионов других видов Cheloniide.Для оценки более старых эмбрионов кожистых спинок (стадии 23–31) можно использовать выбранные измерения, показанные в таблице 7. Эмбрионы поздних стадий (стадии 27–31) всех видов могут быть классифицированы путем определения отношения объема эмбриона (за исключением желтка и оболочек) к желтку по мере прохождения эмбрионом этих стадий (таблица 1).

ОБСУЖДЕНИЕ

Традиционно стандартная серия эмбриональных стадий описывает последовательные морфологические изменения, согласованные с хронологическим возрастом и размером эмбриона, инкубируемого в определенных условиях, и обеспечивает иллюстрации эмбриональных стадий (Yntema 1968; Mahmoud et al.1973 год; Эверт 1985; Фергюсон 1985; Миллер 1985а, 1985б; Реноус и др. 1989). Хотя нумерация и интервал между стадиями, а также морфологические характеристики, описываемые на стадии, несколько различаются в нескольких стандартных схемах стадирования черепах, выбор морфологических характеристик, используемых для определения стадий, не является произвольным (например, открытие глотки). расщелины, формирование конечностей, выражение чешуи и пигментация), потому что эмбрионы черепах демонстрируют один и тот же общий набор морфологических признаков в той же общей последовательности во время развития (Agassiz 1857; Yntema 1968; Mahmoud et al.1973 год; Красц 1982; Эверт 1985; Миллер 1985b; Гринбаум 2002; Гринбаум и Карр, 2002 г.; Вернебург 2009).

Все черепахи откладывают яйца во время средней гаструляции (Ewert 1985; Werneburg 2009), и в результате большинство таблиц стадий для черепах начинаются с момента откладки яиц (например, стадия 0 для Chelydra serpentina ; Yntema 1968), хотя развитие начинается в оплодотворение в яйцеводе. Напротив, 5 предоткладывающих стадий, описанных для морских черепах (Miller 1985b), помещают яйцекладку на стадию 6; следовательно, мы использовали этап 6 для откладки яиц в тональности.

Этот ключ основан на предположениях, 1) что развитие внешних морфологических признаков сходно у всех видов морских черепах (Miller, 1985b) и 2) что при одинаковых условиях инкубации различия в скорости развития и времени выраженность морфологических характеристик среди эмбрионов в яйцах одной и той же кладки невелика, а различия между кладками уменьшены (Miller, 1985b). Эти предположения подтверждаются тем, что на протяжении раннего и среднего развития эмбрионы всех видов морских черепах удивительно похожи.По мере развития четкие различия между таксономическими группами проявляются в следующих точках: между двумя семействами на стадии 23 и между родами на стадии 25. Характеристики видов становятся очевидными на стадии 26, после чего для идентификации видов можно использовать идентификационные ключи взрослых особей. эмбрионов на основе масштабирования (например, Bustard 1972; Pritchard and Mortimer 1999).

После стадии 27 основные эмбриональные изменения включают рост (т. е. выражающийся в увеличении объема эмбриона и соответствующем уменьшении объема желтка) и образование поперечной пластрональной складки, вызванное изгибанием эмбриона по мере его увеличения в пределах яичная скорлупа.Следовательно, в течение последних ∼ 20% периода развития стадирование зависит от оценки отношения объема эмбриона к объему оставшегося желтка и общего угла поперечной пластрональной складки. Crastz (1982) использовал эмбриональный объем как меру развития и обнаружил, что он имел разумную корреляцию с количеством дней развития ( R 2  = 0,96). Стадия 31а представляет собой эмбрион, завершивший эмбриональное развитие и находящийся в процессе извлечения себя из разорванной (проколотой) яичной скорлупы.На стадии 31b эмбрион вышел из яичной скорлупы, начал разворачивать свое тело из изогнутого положения, которое он сохранял внутри яичной скорлупы, и втянул большую часть остатка желтка в свое брюшко; истертые экстраэмбриональные оболочки все еще могут быть прикреплены.

Различные виды морских черепах откладывают яйца разного размера (т. е. диаметра и массы), из которых, в свою очередь, вылупляются детеныши разного размера (Van Buskirk and Crowder 1994; Miller 1997). Из этого следует, что эмбрионы различных видов будут различаться по размеру, даже если они выражают одни и те же репрезентативные характеристики данной эмбриональной стадии.Даже внутри вида использование набора морфологических критериев для определения стадии более последовательно, чем измерения (Yntema 1968). Следовательно, измерения конкретных признаков (например, длины панциря и длины от макушки до крестца) не используются для определения стадии развития в ключе. Однако измерения эмбрионов (табл. 4–7) могут быть использованы для подтверждения стадии развития, определенной с помощью ключа. Измерения отдельных характеристик полезны, но комбинация нескольких характеристик обеспечивает лучшее определение стадии.

Поскольку морфологические изменения сначала происходят быстро, а затем медленнее по мере развития, начальные стадии охватывают более короткие периоды времени, чем более поздние стадии. При 29°С сумма временных интервалов между стадиями составляет примерно 50 сут от откладки яиц (стадия 6) до проклевывания (стадия 31а). С учетом вариаций в результате 1) колебаний температуры во время развития, 2) времени, необходимого для проклевывания яиц и выхода из скорлупы, и 3) времени, необходимого для выкапывания гнезда, прогнозируется, что птенцы появятся на пляже примерно через 55 лет. г после яйцекладки.Хотя инкубационный период варьируется у разных видов и внутри вида в разных местах (Hirth, 1980; Van Buskirk and Crowder, 1994; Limpus, 2009), 55-дневный график приблизительно соответствует инкубационному времени до вылета для большинства Cheloniidae (например, в среднем 55,6 дня и диапазон 47–90 дней в Квинсленде, Австралия; Limpus 2009). Напротив, кожистые детеныши, которые обычно появляются из более глубоких гнезд, обычно требуют больше времени, чтобы достичь поверхности песка (примерно 60 дней; Eckert et al. 2012).

В полевых исследованиях «продолжительность инкубации» обычно определяется как период от откладывания яиц до выхода детенышей на поверхность пляжа (Márquez et al.1976 год; Балаш 1980; Додд 1988; Маркес 1994; Витцель 1983; Годфри и Мросовский, 1997 г.; Год рождения 1997; Лимпус 2009; Эккерт и др. 2012). Напротив, «конец эмбрионального периода» наступает, когда зародыш вылупляется и выходит из яичной скорлупы (sensu Ewert 1979), то есть за несколько дней до выхода детенышей на поверхность пляжа (Godfrey and Mrosovsky 1997). Температура, а также характеристики пляжного субстрата могут изменить интервал между вылуплением в яйцевой камере и выходом на берег на несколько дней (таблица 2) (Christens 1990; Godfrey and Mrosovsky 1997; Houghton and Hays 2001; Koch et al. .2008). По этой причине разрыв яичной скорлупы (проклевывание) является лучшим показателем окончания инкубации, чем выход из гнезда (Gutzke et al., 1984). Принимая во внимание зарегистрированные интервальные различия, Годфри и Мросовский (1997) предложили использовать 5 дней в качестве разумной оценки интервала между проклевыванием и выходом на берег, но этот интервал может варьироваться в зависимости от места гнездования и должен оцениваться в каждом конкретном месте. основа сайта.

Ключ, представленный здесь, предназначен для того, чтобы можно было избежать экстраполяции из таблиц стадий неморских видов и связанных с этим проблем.Хотя многие из морфологических критериев, полученных от неморских видов черепах, применимы к развитию морских черепах, при попытках прямого сравнения могут возникнуть проблемы (Blanck and Sawyer, 1981). Yntema и Mrosovsky (1982) успешно применили стадии Yntema (1968) для C. serpentina к эмбрионам C. caretta . Однако определить время событий развития сложно, поскольку таблицы стадий для неморских видов черепах основаны на эмбрионах, инкубируемых (по крайней мере, частично) при температурах ниже тех, при которых обычно инкубируются яйца морских черепах (например,г., 20°С, С. serpentina , Yntema 1968; 21°C и 23°C, Chrysemys picta belli , Mahmoud et al. 1973).

Кроме того, в результате изолирующего действия субстрата на взаимодействие между водными, газовыми и температурными условиями, в которых находятся эмбрионы, может произойти задержка на несколько часов или более, прежде чем изменения условий окружающей среды повлияют на эмбрионы ( Лолавар и Винекен, 2015). В контексте флуктуаций условий окружающей среды на пляже вариации в прогнозе графика развития приемлемы, поскольку эти экзогенные события не оказывают мгновенного воздействия на эмбрионы.

Сочетание определения успешности вылупления (sensu Miller 1999) и оценки стадии развития эмбрионов морских черепах, содержащихся в яйцах, которые не вылупились, может способствовать пониманию факторов смертности, действующих на гнездовом пляже (Özdemir et al. 2008). или в управляемом инкубатории. Хотя извлечение эмбрионов на средних и поздних стадиях обычно не вызывает затруднений (хотя и запутанно), автолиз тканей эмбрионов на ранних стадиях, погибших в яйцеводе или в течение нескольких часов после откладывания яиц (стадии 2–10; Miller 1985b), может затруднить идентификацию эмбриона. присутствие зародыша при вскрытии мертвого яйца примерно через 2 месяца после появления птенцов из гнезда (Wyneken et al.1988). Следовательно, невозможность найти эмбрион в таких яйцах не обязательно означает, что яйцеклетка не оплодотворена.

Когда этот упрощенный ключ к стадиям развития используется в сочетании со знанием температуры пляжа и продолжительности инкубации, это может помочь в оценке того, когда произошла смертность. В сочетании с обзором данных, доступных для параметров окружающей среды, таких как глубина гнезда, положение на берегу, приливно-отливный цикл, характер штормов и количество осадков, использование ключа может помочь определить вероятные причины смертности и может помочь в разработке и оценке полевых условий. на основе экспериментов.

Клеточный цикл в развитии мыши

  • Adenot PG, Szollosi MS, Geze M, Renard JP and Debey P . (1991). Мол. Воспр. Дев. , 28 , 23–34.

  • Adnane J, Jackson RJ, Nicosia SV, Cantor AB, Pledger WJ и Sebti SM . (2000). Онкоген , 19 , 5338–5347.

  • Aguzzi A, Kiess M, Rued D и Hamel PA . (1996). Трансгеники , 2 , 29–39.

  • Айт-Си-Али С., Рамирез С., Барре Ф.Х., Дхисси Ф., Магнаги-Жаулин Л., Жиро Дж.А., Робин П., Книбилер М., Причард Л.Л., Дюкомман Б., Труш Д. и Харел-Беллан А. .(1998). Природа , 396 , 184–186.

  • Арата Ю., Фудзита М., Охтани К., Кидзима С. и Като Д.Я. (2000). Дж. Биол. хим. , 275 , 6337–6345.

  • Бачварова Р. и Де Леон В. . (1980). Дев. биол. , 74 , 1–8.

  • Берте С., Алим Э., Коппола В., Тессаролло Л. и Калдис П. . (2003). Курс. биол. , 13 , 1775–1785.

  • Биггерс Д.Д., Саммерс М.С. и МакГиннис Л.К.(1997). Гул. Воспр. Обновление , 3 , 125–135.

  • Блейс А. и Динлахт Б.Д. (2004). Курс. мнение Жене. Дев. , 14 , 527–532.

  • Болтон В.Н., Оудс П.Дж. и Джонсон М.Х. (1984). Дж. Эмбриол. Эксп. Морфол. , 79 , 139–163.

  • Bouniol C, Nguyen E и Debey P . (1995). Экспл. Сотовый рез. , 218 , 57–62.

  • Bouniol-Baly C, Nguyen E, Besombes D и Debey P .(1997). Экспл. Сотовый рез. , 236 , 201–211.

  • Бракен А.П., Чиро М., Кокито А. и Хелин К. . (2004). Тенденции биохим. науч. , 29 , 409–417.

  • Брандес М., Розуэлл И., Кэррингтон М., Кромптон Т., Джейкобс М.А., Кирк Дж., Гэннон Дж. и Хант Т. . (1998). Проц. Натл. акад. науч. США , 95 , 4344–4349.

  • Бругаролас Дж., Бронсон Р.Т. и Джекс Т. (1998). J. Cell Biol. , 141 , 503–514.

  • Бернс К. Х., Агно Дж. Э., Сичински П. и Мацук М. М. . (2003). Мол. Эндокринол. , 17 , 2053–2069.

  • Каррано А.С., Эйтан Э., Хершко А. и Пагано М. . (1999). Нац. Клеточная биол. , 1 , 193–199.

  • Чан Ф.К., Чжан Дж., Ченг Л., Шапиро Д.Н. и Виното А. . (1995). Мол. Клетка. биол. , 15 , 2682–2688.

  • Чепмен Д.Л. и Вольгемут Д.Дж. (1992). Мол.Воспр. Дев. , 33 , 259–269.

  • Чепмен Д.Л. и Вольгемут Д.Дж. (1993). Разработка , 118 , 229–240.

  • Чен Б. и Поллард Дж.В. (2003). Мол. Эндокринол. , 17 , 1368–1381.

  • Чен Д., Ливне-бар И., Вандерлуит Дж.Л., Слэк Р.С., Агохия М. и Бремнер Р. . (2004). Раковая ячейка , 5 , 539–551.

  • Чен М.С., Хуров Дж., Уайт Л.С., Вудфорд-Томас Т. и Пивника-Вормс Х.(2001). Мол. Клетка. биол. , 21 , 3853–3861.

  • Чен П., Зинди Ф., Абдала С., Лю Ф., Ли С., Руссель М.Ф. и Сегил Н. (2003). Нац. Клеточная биол. , 5 , 422–426.

  • Чен З., Инджеян В.Б., Макманус М., Ван Л. и Динлахт Б.Д. (2002). Дев. Сотовый , 3 , 339–350.

  • Ченг М., Оливье П., Диль Дж. А., Феро М., Руссель М. Ф., Робертс Дж. М. и Шерр С. Дж. . (1999). EMBO J. , 18 , 1571–1583.

  • Чой Т., Аоки Ф., Мори М., Ямасита М., Нагахама Ю. и Комото К. (1991). Разработка , 113 , 789–795.

  • Цимерих М.А., Кенни А.М., Сичинская Е., Калащинская И., Бронсон Р.Т., Рович Д.Х., Гарднер Х. и Сичинский П. . (2002). Гены Дев. , 16 , 3277–3289.

  • Цимерих М.А., Маро Б. и Кубяк Ю.З. (1999). Зигота , 7 , 293–300.

  • Кларк А.Дж., Дойл К.М. и Гумберт П.О.(2004). Кровь , 104 , 1324–1326.

  • Кларк А.Р., Маандаг Э.Р., ван Роон М., ван дер Лугт Н.М., ван дер Валк М., Хупер М.Л., Бернс А. и те Риле Х. (1992). Природа , 359 , 328–330.

  • Клауд Дж.Э., Роджерс С., Реза Т.Л., Зибольд У., Стоун Дж.Р., Пикард М.Х., Кэрон А.М., Бронсон Р.Т. и Лис Дж.А. (2002). Мол. Клетка. биол. , 22 , 2663–2672.

  • Кобриник Д., Ли М.Х., Хэннон Г., Маллиган Г., Бронсон Р.Т., Дайсон Н., Харлоу Э., Бич Д., Вайнберг Р.А. и Джекс Т.(1996). Гены Дев. , 10 , 1633–1644.

  • Копп А.Дж. (1978). Дж. Эмбриол. Эксп. Морфол. , 48 , 109–125.

  • Коверли Д., Пелизон С., Тревик С. и Ласки Р.А. (2000). J. Cell Sci. , 113 (часть 11), 1929–1938 гг.

  • Кросс JC . (2000). Семин. Сотовый Дев. биол. , 11 , 105–113.

  • Дагнино Л., Фрай С.Дж., Бартли С.М., Фарнхэм П., Галли Б.Л. и Филлипс Р.А.(1997а). Мех. Дев. , 66 , 13–25.

  • Дагнино Л., Фрай С.Дж., Бартли С.М., Фарнхэм П., Галли Б.Л. и Филлипс Р.А. (1997б). Сотовый. Разница в росте. , 8 , 553–563.

  • Даме Т., Вуд Дж., Ливингстон Д.М. и Гобац С. . (2002). евро. Дж. Биохим. , 269 , 5030–5036.

  • Данненберг Дж. Х., ван Россум А., Шуйфф Л. и те Риле Х. (2000). Гены Дев. , 14 , 3051–3064.

  • де Брюин А., Майти Б., Джакои Л., Тиммерс С., Буерки Р. и Леоне Г. . (2003). Дж. Биол. хим. , 278 , 42041–42049.

  • den Elzen N и Pines J . (2001). J. Cell Biol. , 153 , 121–136.

  • Дэн К., Чжан П., Харпер Дж. В., Элледж С. Дж. и Ледер П. . (1995). Сотовый , 82 , 675–684.

  • Димова Д.К. и Дайсон Н.Дж. (2005). Онкоген , 24 , 2810–2826.

  • Ди Стефано Л., Дженсен М.Р. и Хелин К. (2003). EMBO J. , 22 , 6289–6298.

  • Донахью РП . (1972). Дж. Экспл. Зоол. , 180 , 305–318.

  • Донзелли М. и Драэтта Г.Ф. (2003). EMBO Rep. , 4 , 671–677.

  • Драэтта Г., Лука Ф., Вестендорф Дж., Бризуэла Л., Рудерман Дж. и Бич Д. (1989). Сотовый , 56 , 829–838.

  • Дравиам В.М., Орречия С., Лоу М., Парди Р. и Пайнс Дж.(2001). J. Cell Biol. , 152 , 945–958.

  • Дулич В., Кауфманн В.К., Уилсон С.Дж., Тлсти Т.Д., Лис Э., Харпер Дж.В., Элледж С.Дж. и Рид С.И. (1994). Сотовый , 76 , 1013–1023.

  • Эгган К., Акуцу Х., Лоринг Дж., Джексон-Грусби Л., Клемм М., Райдаут III В.М., Янагимачи Р. и Джениш Р. . (2001). Проц. Натл. акад. науч. США , 98 , 6209–6214.

  • Эль-Дейри В.С., Токино Т., Велкулеску В.Е., Леви Д.Б., Парсонс Р., Трент Дж.М., Лин Д., Мерсер В.Е., Кинзлер К.В. и Фогельштейн Б.(1993). Сотовый , 75 , 817–825.

  • Эппиг Дж.Дж. (1996). Репрод. Плодородный. Дев. , 8 , 485–489.

  • Фааст Р., Уайт Дж., Картрайт П., Крокер Л., Сарцевик Б. и Далтон С. . (2004). Онкоген , 23 , 491–502.

  • Фантл В., Стэмп Г., Эндрюс А., Розуэлл И. и Диксон С. . (1995). Гены Дев. , 9 , 2364–2372.

  • Фельзиен Л.К., Фаррелл С., Беттс Дж.К., Мосавин Р. и Набель Г.Дж.(1999). Мол. Клетка. биол. , 19 , 4241–4246.

  • Фергюсон К.Л., Вандерлуит Дж.Л., Хеберт Дж.М., Макинтош В.К., Тиббо Э., Маклаурин Дж.Г., Парк Д.С., Уоллес В.А., Воийс М., МакКоннелл С.К. и Слэк Р.С. (2002). EMBO J. , 21 , 3337–3346.

  • Fero ML, Randel E, Gurley KE, Roberts JM и Kemp CJ. (1998). Природа , 396 , 177–180.

  • Феро М.Л., Ривкин М., Таш М., Портер П., Кароу С.Е., Фирпо Э., Поляк К., Цай Л.Х., Броуди В., Перлмуттер Р.М., Каушанский К. и Робертс Дж.М.(1996). Сотовый , 85 , 733–744.

  • Филд С.Дж., Цай Ф.Ю., Куо Ф., Зубиага А.М., Кэлин младший В.Г., Ливингстон Д.М., Оркин С.Х. и Гринберг М.Е. (1996). Сотовый , 85 , 549–561.

  • Флач Г., Джонсон М.Х., Брауде П.Р., Тейлор Р.А. и Болтон В.Н. (1982). EMBO J. , 1 , 681–686.

  • Франклин Д.С., Годфри В.Л., Ли Х., Ковалев Г.И., Шунховен Р., Чен-Киан С., Су Л. и Сюн Ю. . (1998). Гены Дев. , 12 , 2899–2911.

  • Франклин Д.С., Годфри В.Л., О’Брайен Д.А., Дэн С. и Сюн Ю. . (2000). Мол. Клетка. биол. , 20 , 6147–6158.

  • Friend SH, Bernards R, Rogelj S, Weinberg RA, Rapaport JM, Albert DM и Dryja TP . (1986). Природа , 323 , 643–646.

  • Фучимото Д., Мизукоши А., Шульц Р.М., Сакаи С. и Аоки Ф. (2001). Биол. Воспр. , 65 , 986–993.

  • Фюрстенталь Л., Кайзер Б.К., Суонсон С. и Джексон П.К. (2001). J. Cell Biol. , 152 , 1267–1278.

  • Фуруно Н., Ден Эльзен Н. и Пайнс Дж. (1999). J. Cell Biol. , 147 , 295–306.

  • Габриэлли Б.Г., Де Соуза С.П., Тонкс И.Д., Кларк Дж.М., Хейворд Н.К. и Эллем К.А. (1996). J. Cell Sci. , 109 (часть 5), 1081–1093.

  • Галлант П. и Нигг Э.А.(1994). EMBO J. , 13 , 595–605.

  • Гарсия И., Мурга М., Викарио А., Филд С.Дж. и Субиага А.М. (2000). Сотовый. Разница в росте. , 11 , 91–98.

  • Гаубац С., Линдеман Г.Дж., Исида С., Якои Л., Невинс Дж.Р., Ливингстон Д.М. и Ремпель Р.Е. (2000). Мол. Сотовый , 6 , 729–735.

  • Гэн Ю., Ю. К., Сичинска Э., Дас М., Бронсон Р. Т. и Сичински П. . (2001). Проц. Натл. акад.науч. США , 98 , 194–199.

  • Гэн Ю., Ю. К., Сичинска Э., Дас М., Шнайдер Дж. Э., Бхаттачарья С., Райдаут В. М., Бронсон Р. Т., Гарднер Х. и Сичински П. . (2003). Сотовый , 114 , 431–443.

  • Джорджия С. и Бхушан А. (2004). Дж. Клин. Инвестировать. , 114 , 963–968.

  • Жирар Ф., Штраусфельд У., Фернандес А. и Лэмб Н.Дж. (1991). Сотовый , 67 , 1169–1179.

  • Гудблед Дж.Ф.(1977). Акта Анат. (Базель) , 98 , 162–182.

  • Гопалкришнан Р.В., Долле П., Маттеи М.Г., Ла Танг Н.Б. и Кедингер К. (1996). Онкоген , 13 , 2671–2680.

  • Грана Х, Гаррига Дж. и Майол Х. (1998). Онкоген , 17 , 3365–3383.

  • Гуан К.Л., Дженкинс К.В., Ли И., О’Киф К.Л., Но С., Ву С., Заривала М., Матера А.Г. и Сюн И. . (1996). Мол. биол. Клетка. , 7 , 57–70.

  • Хэгтинг А., Карлссон С., Клют П., Джекман М. и Пайнс Дж. (1998). EMBO J. , 17 , 4127–4138.

  • Хэннон Г.Дж. и Бич Д. (1994). Природа , 371 , 257–261.

  • Harbour JW, Luo RX, Dei Santi A, Postigo AA и Dean DC. (1999). Сотовый , 98 , 859–869.

  • Харпер Дж.В., Адами Г.Р., Вей Н., Кейомарси К. и Элледж С.Дж. (1993). Сотовый , 75 , 805–816.

  • Харрисон Д.Дж., Хупер М.Л., Армстронг Д.Ф. и Кларк А.Р. (1995). Онкоген , 10 , 1615–1620.

  • Хатада И., Охаси Х., Фукусима Ю., Канеко Ю., Иноуэ М., Комото Ю., Окада А., Охиши С., Набетани А., Морисаки Х., Накаяма М., Ниикава Н. и Мукаи Т. . (1996). Нац. Жене. , 14 , 171–173.

  • Хелин К., Ву К.Л., Фаттэй А.Р., Лис Дж.А., Динлахт Б.Д., Нгву К. и Харлоу Э. (1993). Гены Дев. , 7 , 1850–1861.

  • Хенгст Л. и Рид С.И. (1996). Наука , 271 , 1861–1864.

  • Hirai H, Roussel MF, Kato JY, Ashmun RA и Sherr CJ. (1995). Мол. Клетка. биол. , 15 , 2672–2681.

  • Хоффманн И., Драэтта Г. и Карсенти Э. (1994). EMBO J. , 13 , 4302–4310.

  • Хоган Б., Беддингтон Р.С., Константини Ф. и Лейси Э. (1994). Манипулирование эмбрионом мыши.Лабораторный справочник . Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор: Колд-Спринг-Харбор, стр. 19–114.

    Google ученый

  • Хоулетт С.К. и Болтон В.Н. (1985). Дж. Эмбриол. Эксп. Морфол. , 87 , 175–206.

  • Ху Н., Гутсманн А., Герберт Д.С., Брэдли А., Ли В.Х. и Ли Э.Ю. (1994). Онкоген , 9 , 1021–1027.

  • Huard JM, Forster CC, Carter ML, Sicinski P и Ross ME.(1999). Развитие , 126 , 1927–1935.

  • Hulit J, Wang C, Li Z, Albanese C, Rao M, Di Vizio D, Shah S, Byers SW, Mahmood R, Augenlicht LH, Russell R и Pestell RG. (2004). Мол. Клетка. биол. , 24 , 7598–7611.

  • Гумберт П.О., Роджерс С., Ганиатсас С., Ландсберг Р.Л., Тримарчи Дж.М., Дандапани С., Бругнара С., Эрдман С., Шренцель М., Бронсон Р.Т. и Лис Дж.А. (2000а). Мол. Сотовый , 6 , 281–291.

  • Гумберт П.О., Верона Р., Тримарчи Дж.М., Роджерс С., Дандапани С. и Лис Дж.А. (2000б). Гены Дев. , 14 , 690–703.

  • Иглесиас А., Мурга М., Ларесгоити У., Скуди А., Берналес И., Фуллаондо А., Морено Б., Ллорета Дж., Филд С.Дж., Real FX и Субиага А.М. (2004). Дж. Клин. Инвестировать. , 113 , 1398–1407.

  • Ивамори Н., Найто К., Сугиура К. и Тодзё Х. (2002). ФЭБС Письмо. , 526 , 119–123.

  • Джекман М., Ферт М. и Пайнс Дж. (1995). EMBO J. , 14 , 1646–1654.

  • Джекс Т., Фазели А., Шмитт Э.М., Бронсон Р.Т., Гуделл М.А. и Вайнберг Р.А. (1992). Природа , 359 , 295–300.

  • Джейкобс Дж.Дж., Кибум К., Марино С., ДеПиньо Р.А. и ван Лахуизен М. (1999). Природа , 397 , 164–168.

  • Джанатпур М.Дж., Макмастер М.Т., Генбачев О., Чжоу Ю., Донг Дж., Кросс Дж.К., Исраэль М.А. и Фишер С.Дж.(2000). Разработка , 127 , 549–558.

  • Цзян З., Заксенхаус Э., Галли Б.Л. и Филлипс Р.А. (1997). Онкоген , 14 , 1789–1797.

  • Джинно С., Суто К., Нагата А., Игараши М., Канаока Ю., Нодзима Х. и Окаяма Х. (1994). EMBO J. , 13 , 1549–1556.

  • Джираватнотай С., Мунс Д.С., Стокко С.О., Фрэнкс Р., Хейлз Д.Б., Гибори Г. и Киёкава Х. (2003). Дж. Биол. хим., 278 , 17021–17027.

  • Какизука А., Себастьян Б., Боргмейер У., Херманс-Боргмейер И., Боладо Дж., Хантер Т., Хекстра М.Ф. и Эванс Р.М. (1992). Гены Дев. , 6 , 578–590.

  • Калдис П . (1999). Сотовый. Мол. Жизнь наук. , 55 , 284–296.

  • Карлссон С., Катич С., Хагтинг А., Хоффманн И. и Пайнс Дж. (1999). J. Cell Biol. , 146 , 573–584.

  • Херруш З., Бег А., Стехелин Д. и Монте Д. .(2001). Биохим. Биофиз. Рез. коммун. , 288 , 22–33.

  • Киёкава Х., Кинеман Р.Д., Манова-Тодорова К.О., Соареш В.С., Хоффман Э.С., Оно М., Ханам Д., Хайдей А.С., Фроман Л.А. и Кофф А. . (1996). Сотовый , 85 , 721–732.

  • Кон М.Дж., Бронсон Р.Т., Харлоу Э., Дайсон Н.Дж. и Ямасаки Л. (2003). Разработка , 130 , 1295–1305.

  • Кон М.Дж., Леунг С.В., Кринити В., Агромайор М. и Ямасаки Л.(2004). Мол. Клетка. биол. , 24 , 7197–7205.

  • Кохоутек Дж., Дворжак П. и Хэмпл А. (2004). Биол. Воспр. , 70 , 139–145.

  • Kong Y, Johnson SE, Taparowsky EJ и Konieczny SF . (1995). Мол. Клетка. биол. , 15 , 5205–5213.

  • Корсисаари Н., Росси Д.Дж., Паэтау А., Чарнай П., Хенкемейер М. и Макела Т.П. (2002). J. Cell Sci. , 115 , 4275–4284.

  • Ковальчик А., Филипковски Р.К., Рыльски М., Вильчински Г.М., Конопацкий Ф.А., Яворски Дж., Цемерих М.А., Сичински П. и Качмарек Л. (2004). J. Cell Biol. , 167 , 209–213.

  • Козар К., Цимерих М.А., Ребел В.И., Шигемацу Х., Загоздзон А., Сичинска Э., Гэн Ю., Ю.К., Бхаттачарья С., Бронсон Р.Т., Акаши К. и Сичински П. . (2004). Сотовый , 118 , 477–491.

  • Кримпенфорт П., Куон К.С., Муи В.Дж., Лунстра А. и Бернс А. .(2001). Природа , 413 , 83–86.

  • Круде Т., Джекман М., Пайнс Дж. и Ласки Р.А. (1997). Сотовый , 88 , 109–119.

  • Кусек Дж. К., Грин Р. М., Наджент П. и Пизано М. М. . (2000). Междунар. Дж. Дев. биол. , 44 , 267–277.

  • Кушнер Дж. А., Цимерих М. А., Сичинска Э., Вартшоу Л. М., Тета М., Лонг С. Ю., Сичински П. и Уайт М. Ф. . Мол. Клетка. биол. (в печати).

  • Лам Э.В., Глассфорд Дж., Банерджи Л., Томас Н.С., Сичински П. и Клаус Г.Г.(2000). Дж. Биол. хим. , 275 , 3479–3484.

  • Ламмер К., Вагерер С., Саффрич Р., Мертенс Д., Ансорж В. и Хоффманн И. (1998). J. Cell Sci. , 111 (часть 16), 2445–2453.

  • Ласорелла А., Нозеда М., Бейна М., Йокота Ю. и Явароне А. . (2000). Природа , 407 , 592–598.

  • Латрес Э., Малумбрес М., Сотильо Р., Мартин Дж., Ортега С., Мартин-Кабальеро Дж., Флорес Дж.М., Кордон-Кардо С. и Барбацид М.(2000). EMBO J. , 19 , 3496–3506.

  • Лоусон К.А., Менесес Дж.Дж. и Педерсен Р.А. (1991). Разработка , 113 , 891–911.

  • Леклерк В., Тассан Дж. П., О’Фаррелл П. Х., Нигг Э. А. и Леопольд П. . (1996). Мол. биол. Клетка. , 7 , 505–513.

  • LeCouter JE, Kablar B, Hardy WR, Ying C, Megeney LA, May LL и Rudnicki MA. (1998а). Мол. Клетка. биол. , 18 , 7455–7465.

  • LeCouter JE, Kablar B, Whyte PF, Ying C и Rudnicki MA . (1998b). Разработка , 125 , 4669–4679.

  • Lee EY, Cam H, Ziebold U, Rayman JB, Lees JA и Dynlacht BD. (2002). Раковая ячейка , 2 , 463–472.

  • Lee EY, Chang CY, Hu N, Wang YC, Lai CC, Herrup K, Lee WH и Bradley A . (1992). Природа , 359 , 288–294.

  • Ли М.Х., Рейнисдоттир И. и Массагью Дж.(1995). Гены Дев. , 9 , 639–649.

  • Ли М.Х., Уильямс Б.О., Маллиган Г., Мукай С., Бронсон Р.Т., Дайсон Н., Харлоу Э. и Джекс Т. . (1996). Гены Дев. , 10 , 1621–1632.

  • Lee WH, Bookstein R, Hong F, Young LJ, Shew JY и Lee EY. (1987). Наука , 235 , 1394–1399.

  • Леопольд П. и О’Фаррелл П. Х. . (1991). Сотовый , 66 , 1207–1216.

  • Леунг С., Лингбик М., Шахова О., Лю Дж., Тангер Э., Саремаслани П., Ван Лохейзен М. и Марино С. .(2004). Природа , 428 , 337–341.

  • Лью Д.Дж., Дулич В. и Рид С.И. (1991). Сотовый , 66 , 1197–1206.

  • Li FX, Zhu JW, Tessem JS, Bellke J, Varella-Garcia M, Jensen J, Hogan CJ и DeGregori J . (2003). Проц. Натл. акад. науч. США , 100 , 12935–12940.

  • Ли Ю., Дженкинс К.В., Николс М.А. и Сюн Ю. (1994). Онкоген , 9 , 2261–2268.

  • Линкольн А.Дж., Викрамасингх Д., Штейн П., Шульц Р.М., Палко М.Е., Де Мигель М.П., ​​Тессаролло Л. и Донован П.Дж. (2002). Нац. Жене. , 30 , 446–449.

  • Линдеман Г.Дж., Дагнино Л., Гаубац С., Сюй Ю., Бронсон Р.Т., Уоррен Х.Б. и Ливингстон Д.М. (1998). Гены Дев. , 12 , 1092–1098.

  • Липински М.М., Маклеод К.Ф., Уильямс Б.О., Маллани Т.Л., Кроули Д. и Джекс Т. . (2001). EMBO J. , 20 , 3402–3413.

  • Liu D, Liao C и Wolgemuth DJ. (2000). Дев. биол. , 224 , 388–400.

  • Лю Д., Мацук М.М., Сун В.К., Го Ц., Ван П. и Вольгемут Д.Дж. (1998). Нац. Жене. , 20 , 377–380.

  • Логан Н., Делавейн Л., Грэм А., Рейли С., Уилсон Дж., Бруммелькамп Т.Р., Хиджманс Э.М., Бернардс Р. и Ла Танг Н.Б. (2004). Онкоген , 23 , 5138–5150.

  • Лозано Х.С., Перре Э., Шатт П., Арнольд С., Поселье Г. и Пикард А. .(2002). Биохим. Биофиз. Рез. коммун. , 291 , 406–413.

  • Лундберг А.С. и Вайнберг Р.А. (1998). Мол. Клетка. биол. , 18 , 753–761.

  • Лундгрен К., Уолворт Н., Бухер Р., Дембски М., Киршнер М. и Бич Д. (1991). Сотовый , 64 , 1111–1122.

  • Ма Т., Ван Тайн Б.А., Вэй Ю., Гарретт М.Д., Нельсон Д., Адамс П.Д., Ван Дж., Цинь Дж., Чоу Л.Т. и Харпер Дж.В. (2000). Гены Дев., 14 , 2298–2313.

  • Маандаг Э.К., ван дер Валк М., Влаар М., Фелткамп С., О’Брайен Дж., ван Роон М., ван дер Лугт Н., Бернс А. и те Риеле Х. (1994). EMBO J. , 13 , 4260–4268.

  • Mac Auley A, Werb Z и Mirkes PE . (1993). Разработка , 117 , 873–883.

  • Макферсон Д., Сейдж Дж., Кроули Д., Трампп А., Бронсон Р.Т. и Джекс Т. (2003). Мол. Клетка. биол. , 23 , 1044–1053.

  • Макферсон Д., Сейдж Дж., Ким Т., Хо Д., Маклафлин М.Е. и Джекс Т. . (2004). Гены Дев. , 18 , 1681–1694.

  • Маккуин Х.А. и Джонсон М.Х. (1983). Дж. Эмбриол. Эксп. Морфол. , 77 , 297–308.

  • Махер Э.Р. и Рейк В. (2000). Дж. Клин. Инвестировать. , 105 , 247–252.

  • Майланд Н., Подтележников А.В., Грот А., Манн М., Бартек Дж. и Лукас Дж. (2002). EMBO J. , 21 , 5911–5920.

  • Малек Н.П., Сандберг Х., МакГрю С., Накаяма К., Кириакидес Т.Р., Робертс Дж.М. и Кириакидис Т.Р. (2001). Природа , 413 , 323–327.

  • Малумбрес М и Барбацид М . (2001). Нац. Преподобный Рак , 1 , 222–231.

  • Малумбрес М., Сотильо Р., Сантамария Д., Галан Дж., Сересо А., Ортега С., Дубус П. и Барбацид М. . (2004). Сотовый , 118 , 493–504.

  • Мартин-Кабальеро Х., Флорес Х.М., Гарсия-Паленсия П. и Серрано М. (2001). Рак Рез. , 61 , 6234–6238.

  • Мацуока С., Томпсон Дж. С., Эдвардс М. С., Бартлетта Дж. М., Гранди П., Каликин Л. М., Харпер Дж. В., Элледж С. Дж. и Файнберг А. П. . (1996). Проц. Натл. акад. науч. США , 93 , 3026–3030.

  • Майер В., Смит А., Фунделе Р. и Хааф Т. . (2000). J. Cell Biol. , 148 , 629–634.

  • McGowan CH и Russell P . (1993). EMBO J. , 12 , 75–85.

  • Меттус Р.В. и Рэйн С.Г. (2003). Онкоген , 22 , 8413–8421.

  • Милиани Де Марваль П.Л., Масиас Э., Раунбелер Р., Сичински П., Киёкава Х., Джонсон Д.Г., Конти С.Дж. и Родригес-Пуэбла М.Л. (2004). Мол. Клетка. биол. , 24 , 7538–7547.

  • Minshull J, Golsteyn R, Hill CS и Hunt T .(1990). EMBO J. , 9 , 2865–2875.

  • Митра Дж. и Шульц Р.М. (1996). J. Cell Sci. , 109 (часть 9), 2407–2415.

  • Мур Г.Д., Аябе Т., Копф Г.С. и Шульц Р.М. (1996). Мол. Воспр. Дев. , 45 , 264–275.

  • Моргенбессер С.Д., Уильямс Б.О., Джекс Т. и Де Пиньо Р.А. (1994). Природа , 371 , 72–74.

  • Моррис Л., Аллен К.Е. и Ла Танг Н.Б.(2000). Нац. Клеточная биол. , 2 , 232–239.

  • Мюллер Х., Бракен А.П., Вернелл Р., Морони М.С., Кристианс Ф., Грассилли Э., Просперини Э., Виго Э., Олинер Д.Д. и Хелин К. . (2001). Гены Дев. , 15 , 267–285.

  • Мураока Р.С., Ленферинк А.Е., Лоу Б., Гамильтон Э., Брантли Д.М., Робак Л.Р. и Артеага К.Л. (2002). Мол. Клетка. биол. , 22 , 2204–2219.

  • Мурга М., Фернандес-Капетильо О., Филд С.Дж., Морено Б., Борладо Л.Р., Фудзивара Ю., Баломенос Д., Викарио А., Каррера А.С., Оркин С.Х., Гринберг М.Э. и Зубиага А.М.(2001). Immunity , 15 , 959–970.

  • Murphy M, Stinnakre MG, Senamaud-Beaufort C, Winston NJ, Sweeney C, Kubelka M, Carrington M, Brechot C and Sobczak-Thepot J . (1997). Nat. Genet. , 15 , 83–86.

  • Nakayama K, Ishida N, Shirane M, Inomata A, Inoue T, Shishido N, Horii I, Loh DY and Nakayama K . (1996). Cell , 85 , 707–720.

  • Nakayama K, Nagahama H, Minamishima YA, Miyake S, Ishida N, Hatakeyama S, Kitagawa M, Iemura S, Natsume T and Nakayama KI .(2004). Дев. Сотовый , 6 , 661–672.

  • Нгуен Т.Б., Манова К., Каподиечи П., Линдон С., Боттега С., Ван XY, Рефик-Роджерс Дж., Пайнс Дж., Вольгемут Д.Дж. и Кофф А. . (2002). Дж. Биол. хим. , 277 , 41960–41969.

  • Nieduszynski CA, Murray J и Carrington M . (2002). Геном Биол. , 3 , исследование0070.1–исследование0070.8.

  • Никитин А. и Ли В.Х. (1996). Гены Дев., 10 , 1870–1879 гг.

  • Никитин А.Ю., Хуарес-Перес М.И., Ли С., Хуанг Л. и Ли В.Х. (1999). Проц. Натл. акад. науч. США , 96 , 3916–3921.

  • Нович Б.Г., Спайсер Д.Б., Ким П.С., Чунг В.Л. и Лассар А.Б. (1999). Курс. биол. , 9 , 449–459.

  • Обая А.Ж. и Седивый Ж.М. (2002). Сотовый. Мол. Жизнь наук. , 59 , 126–142.

  • Оцубо М., Теодорас А.М., Шумахер Дж., Робертс Дж.М. и Пагано М. .(1995). Мол. Клетка. биол. , 15 , 2612–2624.

  • Окуда М., Хорн Х.Ф., Тарапор П., Токуяма Ю., Смулиан А.Г., Чан П.К., Кнудсен Э.С., Хофманн И.А., Снайдер Д.Д., Бове К.Е. и Фукасава К. . (2000). Ячейка , 103 , 127–140.

  • Ооката К., Хисанага С., Окумура Э. и Кисимото Т. . (1993). J. Cell Sci. , 105 (часть 4), 873–881.

  • Ортега С., Малумбрес М. и Барбацид М. (2002). Биохим.Биофиз. Acta , 1602 , 73–87.

  • Ортега С., Прието И., Одадзима Дж., Мартин А., Дубус П., Сотильо Р., Барберо Дж.Л., Малумбрес М. и Барбацид М. . (2003). Нац. Жене. , 35 , 25–31.

  • Пагано М . (2004). Мол. Сотовый , 14 , 414–416.

  • Пагано М., Пепперкок Р., Верде Ф., Ансорж В. и Драэтта Г. . (1992). EMBO J. , 11 , 961–971.

  • Пагано М., Тэм С.В., Теодорас А.М., Беэр-Ромеро П., Дель Сал Г., Чау В., Ю П.Р., Драэтта Г.Ф. и Рольф М. .(1995). Наука , 269 , 682–685.

  • Палена А., Манджаказале Р., Маньяно А.Р., Барбери Л., Джордано Р., Спадафора С. и Лавия П. . (2000). Мех. Дев. , 97 , 211–215.

  • Паризи Т., Бек А.Р., Ружье Н., Макнейл Т., Люциан Л., Верб З. и Амати Б. (2003). EMBO J. , 22 , 4794–4803.

  • Парк И.К., Цянь Д., Киль М., Беккер М.В., Пихалья М., Вайсман И.Л., Моррисон С.Дж. и Кларк М.Ф.(2003). Природа , 423 , 302–305.

  • Парк М.С., Розай Дж., Нгуен Х.Т., Каподьечи П., Кордон-Кардо С. и Кофф А. . (1999). Проц. Натл. акад. науч. США , 96 , 6382–6387.

  • Паркер С.Б., Эйхеле Г., Чжан П., Ролз А., Сэндс А.Т., Брэдли А., Олсон Э.Н., Харпер Дж.В. и Элледж С.Дж. (1995). Наука , 267 , 1024–1027.

  • Перкинс Н.Д., Фельзин Л.К., Беттс Дж.К., Леунг К., Бич Д.Х. и Набель Г.Дж.(1997). Наука , 275 , 523–527.

  • Петерсен Б.О., Лукас Дж., Соренсен К.С., Бартек Дж. и Хелин К. . (1999). EMBO J. , 18 , 396–410.

  • Пайнс Дж. и Хантер Т. (1989). Сотовый , 58 , 833–846.

  • Пайнс Дж. и Хантер Т. (1991). J. Cell Biol. , 115 , 1–17.

  • Поляк К., Ли М.Х., Эрджумент-Бромаж Х., Кофф А., Робертс Дж.М., Темпст П. и Массагью Дж. .(1994). Сотовый , 78 , 59–66.

  • Пулман Р.А., Гилкрист Р. и Брукс Г. . (1998). Междунар. Дж. Кардиол. , 67 , 133–142.

  • Quelle DE, Ashmun RA, Hannon GJ, Rehberger PA, Trono D, Richter KH, Walker C, Beach D, Sherr CJ и Serrano M . (1995а). Онкоген , 11 , 635–645.

  • Quelle DE, Zindy F, Ashmun RA и Sherr CJ. (1995б). Сотовый , 83 , 993–1000.

  • Рамоцкий М.Б., Уайт М.А., Конечны С.Ф. и Тапаровский Э.Дж. (1998). Дж. Биол. хим. , 273 , 17696–17701.

  • Рэйн С.Г., Дубус П., Меттус Р.В., Гэлбрет Э.Дж., Боден Г., Редди Э.П. и Барбацид М. (1999). Нац. Жене. , 22 , 44–52.

  • Ravnik SE и Wolgemuth DJ. (1996). Дев. биол. , 173 , 69–78.

  • Ремпель Р.Е., Саенс-Роблес М.Т., Стормс Р., Морхэм С., Ишида С., Энгель А., Якой Л., Мельхем М.Ф., Пипас Дж.М., Смит С. и Невинс Дж.Р.(2000). Мол. Сотовый , 6 , 293–306.

  • Рен С. и Роллинз Б.Дж. (2004). Сотовый , 117 , 239–251.

  • Резницкий Д., Хенгст Л. и Рид С.И. (1995). Мол. Клетка. биол. , 15 , 4347–4352.

  • Рикерт П., Сегеззи В., Шанахан Ф., Чо Х. и Лис Э. . (1996). Онкоген , 12 , 2631–2640.

  • Робанус-Маандаг Э., Деккер М., ван дер Валк М., Карроцца М.Л., Джинни Дж.С., Данненберг Дж.Х., Бернс А. и те Риле Х.(1998). Гены Дев. , 12 , 1599–1609.

  • Роблес А.И., Родригес-Пуэбла М.Л., Глик А.Б., Тремпус С., Хансен Л., Сичински П., Теннант Р.В., Вайнберг Р.А., Юспа С.Х. и Конти С.Дж. (1998). Гены Дев. , 12 , 2469–2474.

  • Родригес-Пуэбла М.Л., Милиани де Марваль Л.П., ЛаКава М., Мунс Д.С., Киёкава Х. и Конти С.Дж. (2002). утра. Дж. Патол. , 161 , 405–411.

  • Роджерс К.Т., Хиггинс П.Д., Милла М.М., Филлипс Р.С. и Горовиц Дж.М.(1996). Проц. Натл. акад. науч. США , 93 , 7594–7599.

  • Росси Д.Дж., Лондсборо А., Корсисаари Н., Пихлак А., Лехтонен Э., Хенкемейер М. и Макела Т.П. (2001). EMBO J. , 20 , 2844–2856.

  • Рассел П. и медсестра П. (1987). Сотовый , 49 , 569–576.

  • Сааведра Х.И., Ву Л., де Брюин А., Тиммерс С., Росол Т.Дж., Вайнштейн М., Робинсон М.Л. и Леоне Г. . (2002). Отличие роста клеток., 13 , 215–225.

  • Сейдж Дж., Миллер А.Л., Перес-Мансера П.А., Высоцкий Дж.М. и Джекс Т. (2003). Природа , 424 , 223–228.

  • Сейдж Дж., Маллиган Г.Дж., Аттарди Л.Д., Миллер А., Чен С., Уильямс Б., Теодору Э. и Джекс Т. (2000). Гены Дев. , 14 , 3037–3050.

  • Саватье П., Лапийонн Х., ван Грунсвен Л.А., Рудкин Б.Б. и Самарут Дж. (1996). Онкоген , 12 , р309–р322.

  • Серрано М., Хэннон Г.Дж. и Бич Д. (1993). Природа , 366 , 704–707.

  • Серрано М., Ли Х., Чин Л., Кордон-Кардо С., Бич Д. и Де Пиньо Р.А. (1996). Сотовый , 85 , 27–37.

  • Sharpless NE, Bardeesy N, Lee KH, Carrasco D, Castrillon DH, Aguirre AJ, Wu EA, Horner JW и DePinho RA. (2001). Природа , 413 , 86–91.

  • Шарплесс Н.Е., Рэмси М.Р., Баласубраманиан П., Кастрильон Д.Х. и ДеПиньо Р.А.(2004). Онкоген , 23 , 379–385.

  • Шифф Р.Дж., Гроудин М., Гордон М., Робертс Дж.М. и Клурман Б.Е. (1997). Гены Дев. , 11 , 1464–1478.

  • Шерр С.Дж. и Робертс Дж.М. (1999). Гены Дев. , 13 , стр.1501–стр.1512.

  • Шерр С.Дж. и Робертс Дж.М. (2004). Гены Дев. , 18 , 2699–2711.

  • Sicinska E, Aifantis I, Le Cam L, Swat W, Borowski C, Yu Q, Ferrando AA, Levin SD, Geng Y, von Boehmer H и Sicinski P .(2003). Раковая ячейка , 4 , 451–461.

  • Сичински П., Донахер Д.Л., Генг И., Паркер С.Б., Гарднер Х., Парк М.Ю., Робкер Р.Л., Ричардс Д.С., МакГиннис Л.К., Биггерс Д.Д., Эппиг Д.Дж., Бронсон Р.Т., Элледж С.Дж. и Вайнберг Р.А. (1996). Природа , 384 , 470–474.

  • Сичински П., Донахер Д.Л., Паркер С.Б., Ли Т., Фазели А., Гарднер Х., Хаслам С.З., Бронсон Р.Т., Элледж С.Дж. и Вайнберг Р.А. (1995). Ячейка , 82 , 621–630.

  • Скапек С.Х., Ри Дж., Спайсер Д.Б. и Лассар А.Б. (1995). Наука , 267 , 1022–1024.

  • Смит Р.К. и Джонсон М.Х. (1986). J. Репрод. Плодородный. , 76 , 393–399.

  • Снег MHL . (1977). Дж. Эмбриол. Эксп. Морфол. , 42 , 293–303.

  • Солвасон Н., Ву В.В., Парри Д., Махони Д., Лам Э.В., Глассфорд Дж., Клаус Г.Г., Сичински П., Вайнберг Р., Лю Ю.Дж., Ховард М. и Лис Э. .(2000). Междунар. Иммунол. , 12 , 631–638.

  • Соренсен Р.А. и Вассарман П.М. (1976). Дев. биол. , 50 , 531–536.

  • Сотильо Р., Дубус П., Мартин Дж., Де ла Куэва Э., Ортега С., Малумбрес М. и Барбацид М. . (2001). EMBO J. , 20 , 6637–6647.

  • Спайк Б.Т., Дирлам А., Диблинг Б.К., Марвин Дж., Уильямс Б.О., Джекс Т. и Маклеод К.Ф. (2004). EMBO J. , 23 , 4319–4329.

  • Стюарт К.Л. и Куллинан Э.Б. (1997). Дев. Жене. , 21 , 91–101.

  • Сторре Дж., Эльзассер Х.П., Фукс М., Ульманн Д., Ливингстон Д.М. и Гаубац С. . (2002). EMBO Реп. , 3 , 695–700.

  • Суттерлути Х., Шатлен Э., Марти А., Вирбелауэр С., Зенфтен М., Мюллер У. и Крек В. . (1999). Нац. Клеточная биол. , 1 , 207–214.

  • Суини С., Мерфи М., Кубелка М., Равник С.Е., Хокинс С.Ф., Вольгемут Д.Дж. и Кэррингтон М. .(1996). Разработка , 122 , 53–64.

  • Такахаши С., Бронсон Р.Т., Соколовский М., Контрерас Б., Ли К.И., Джекс Т., Нода М., Кучерлапати Р. и Юэн М.Е. (2003). Мол. Клетка. биол. , 23 , 5256–5268.

  • Танака К., Парвинен М. и Нигг Э.А. (1997). Экспл. Сотовый рез. , 237 , 264–274.

  • Тассан Дж.П., Жакено М., Леопольд П., Шульц С.Дж. и Нигг Э.А. (1995). Проц. Натл.акад. науч. США , 92 , 8871–8875.

  • Тецу О. и Маккормик Ф. (2003). Раковая клетка , 3 , 233–245.

  • Tetzlaff MT, Bai C, Finegold M, Wilson J, Harper JW, Mahon KA и Elledge SJ . (2004). Мол. Клетка. биол. , 24 , 2487–2498.

  • Тевосян С.Г., Полсон К.Е., Бронсон Р. и Йи А.С. (1996). Сотовый. Разница в росте. , 7 , 43–52.

  • Тонг В., Киёкава Х., Сус Т.Дж., Парк М.С., Соарес В.К., Манова К., Поллард Дж.В. и Кофф А. .(1998). Отличие роста клеток. , 9 , 787–794.

  • Тонг В. и Поллард Дж.В. (2001). Мол. Клетка. биол. , 21 , 1319–1328.

  • Тойошима Ф., Моригути Т., Вада А., Фукуда М. и Нисида Э. (1998). EMBO J. , 17 , 2728–2735.

  • Тойошима Х. и Хантер Т. (1994). Сотовый , 78 , 67–74.

  • Тримарчи Дж.М., Фэйрчайлд Б., Вен Дж. и Лис Дж.А.(2001). Проц. Натл. акад. науч. США , 98 , 1519–1524.

  • Тримарчи Дж.М. и Лис Дж.А. (2002). Нац. Преподобный Мол. Клетка. биол. , 3 , 11–20.

  • Цай К.И., Ху Ю., Маклеод К.Ф., Кроули Д., Ямасаки Л. и Джекс Т. (1998). Мол. Ячейка , 2 , 293–304.

  • Цай Л.Х., Лис Э., Фаха Б., Харлоу Э. и Риабовол К. . (1993). Онкоген , 8 , 1593–1602.

  • Цуцуи Т., Хесаби Б., Мунс Д.С., Пандольфи П.П., Хансель К.С., Кофф А. и Киёкава Х.(1999). Мол. Клетка. биол. , 19 , 7011–7019.

  • Цветков Л.М., Е К.Х., Ли С.Дж., Сун Х. и Чжан Х. . (1999). Курс. биол. , 9 , 661–664.

  • ван ден Хевел С. и Харлоу Э. (1993). Наука , 262 , 2050–2054.

  • ван дер Лугт Н.М., Домен Дж., Линдерс К., ван Роон М., Робанус-Маандаг Э., те Риеле Х., ван дер Валк М., Дешам Дж., Софронев М. и ван Лохейзен М. . (1994). Гены Дев. , 8 , 757–769.

  • Влах Дж., Хеннеке С. и Амати Б. (1997). EMBO J. , 16 , 5334–5344.

  • Wianny F, Real FX, Mummery CL, Van Rooijen M, Lahti J, Samarut J и Savatier P . (1998). Дев. Дин. , 212 , 49–62.

  • Викрамасингх Д., Беккер С., Эрнст М.К., Резник Дж.Л., Центанни Дж.М., Тессаролло Л., Грабель Л.Б. и Донован П.Дж. (1995). Развитие , 121 , 2047–2056.

  • Уильямс Б.О., Ремингтон Л., Альберт Д.М., Мукай С., Бронсон Р.Т. и Джекс Т. (1994а). Нац. Жене. , 7 , 480–484.

  • Уильямс Б.О., Шмитт Э.М., Ремингтон Л., Бронсон Р.Т., Альберт Д.М., Вайнберг Р.А. и Джекс Т. (1994б). EMBO J. , 13 , 4251–4259.

  • Уинстон Н., Бурген-Гульельметти Ф., Цимерих М.А., Кубяк Дж.З., Сенамо-Бофор С., Кэррингтон М., Брешо С. и Собчак-Тепот Дж. . (2000). Дев.биол. , 223 , 139–153.

  • Райт С.Дж. и Лонго Ф.Дж. (1988). Дж. Экспл. Зоол. , 247 , 155–165.

  • Ву С.Л., Цукерберг Л.Р., Нгву С., Харлоу Э. и Лис Дж.А. (1995). Мол. Клетка. биол. , 15 , 2536–2546.

  • Ву Л., де Брюин А., Сааведра Х.И., Старович М., Тримболи А., Ян Ю., Опавска Дж., Уилсон П., Томпсон Дж.С., Островски М.С., Росол Т.Дж., Вуллетт Л.А., Вайнштейн М., Кросс Дж.С., Робинсон М.Л. и Леоне Г.(2003). Природа , 421 , 942–947.

  • Ву Л., Тиммерс С., Майти Б., Сааведра Х.И., Санг Л., Чонг Г.Т., Наколлс Ф., Джангранде П., Райт Ф.А., Филд С.Дж., Гринберг М.Э., Оркин С., Невинс Дж.Р., Робинсон М.Л. и Леоне Г. . (2001). Природа , 414 , 457–462.

  • Ву С и Вольгемут Диджей. (1995). Дев. биол. , 170 , 195–206.

  • Xiong Y, Hannon GJ, Zhang H, Casso D, Kobayashi R и Beach D .(1993). Природа , 366 , 701–704.

  • Ямасаки Л., Бронсон Р., Уильямс Б.О., Дайсон Н.Дж., Харлоу Э. и Джекс Т. (1998). Нац. Жене. , 18 , 360–364.

  • Ямасаки Л., Джекс Т., Бронсон Р., Гойло Э., Харлоу Э. и Дайсон Н.Дж. (1996). Сотовый , 85 , 537–548.

  • Yan Y, Frisen J, Lee MH, Massague J и Barbacid M . (1997). Гены Дев. , 11 , 973–983.

  • Янагимати Р . (1994). Физиология репродукции Том. 1, Нобил Э. и Нил Дж. Д. (ред.). Raven Press: Нью-Йорк, стр. 189–317.

    Google ученый

  • Ян Дж., Бардес Э.С., Мур Дж.Д., Бреннан Дж., Пауэрс М.А. и Корнблут С. . (1998). Гены Дев. , 12 , 2131–2143.

  • Ян Р., Морозетти Р. и Коффлер Х.П. (1997). Рак Рез. , 57 , 913–920.

  • Ye X, Zhu C и Harper JW. (2001). Проц. Натл. акад. науч. США , 98 , 1682–1686.

  • Ю. К., Гэн Ю. и Сичински П. (2001). Природа , 411 , 1017–1021.

  • Zacksenhaus E, Jiang Z, Chung D, Marth JD, Phillips RA и Gallie BL . (1996). Гены Дев. , 10 , 3051–3064.

  • Чжан П., Льежуа Н.Дж., Вонг С., Финеголд М., Хоу Х., Томпсон Дж.С., Сильверман А., Харпер Дж.В., ДеПиньо Р.А. и Элледж С.Дж.(1997). Природа , 387 , 151–158.

  • Чжан П., Вонг С., ДеПиньо Р.А., Харпер Дж.В. и Элледж С.Дж. (1998). Гены Дев. , 12 , 3162–3167.

  • Чжан С.Л., Дюбуа В., Рамзи Э.С., Блисковски В., Морс III Х.К., Таддес-Хит Л., Васс В.К., ДеПиньо Р.А. и Мок Б.А. (2001). Мол. Клетка. биол. , 21 , 310–318.

  • Чжан Ю и Челлаппан С.П. (1995). Онкоген , 10 , 2085–2093.

  • Зиболд У., Реза Т., Кэрон А. и Лис Дж.А. (2001). Гены Дев. , 15 , 386–391.

  • Zindy F, den Besten W, Chen B, Rehg JE, Latres E, Barbacid M, Pollard JW, Sherr CJ, Cohen PE и Roussel MF. (2001). Мол. Клетка. биол. , 21 , 3244–3255.

  • Zindy F, Quelle DE, Roussel MF и Sherr CJ. (1997а). Онкоген , 15 , 203–211.

  • Зинди Ф., Соарес Х., Херцог К.Х., Морган Дж., Шерр С.Дж. и Руссель М.Ф.(1997б). Сотовый. Разница в росте. , 8 , 1139–1150.

  • Зинди Ф., ван Дерсен Дж., Гросвельд Г., Шерр С.Дж. и Руссель М.Ф. (2000). Мол. Клетка. биол. , 20 , 372–378.

  • Цзоу Л. и Стиллман Б. (2000). Мол. Клетка. биол. , 20 , 3086–3096.

  • Стадии развития куриного эмбриона

    Одним из величайших чудес природы является превращение яйца в цыпленка.Птенец появляется после короткой трехнедельной инкубации. Сложность развития невозможно понять без изучения эмбриологии.

    Когда яйцо отложено, происходит некоторое эмбриональное развитие, которое обычно прекращается до тех пор, пока не будут созданы надлежащие условия окружающей среды клетки для возобновления инкубации. Сначала все клетки одинаковы, но по мере развития зародыша наблюдаются клеточные различия. Некоторые клетки могут стать жизненно важными органами; другие становятся крылом или ногой.

    Вскоре после начала инкубации в каудальном или хвостовом конце эмбриона становится виден заостренный утолщенный слой клеток.Эта заостренная область является примитивной полосой и является продольной осью эмбриона. Из первичной полоски развиваются голова и позвоночник зародыша. Образуется предшественник пищеварительного тракта; появляются кровяные островки, которые позже разовьются в сосудистую или кровеносную систему; и начинается глаз.

    На второй день инкубации островки крови начинают соединяться и образуют сосудистую систему, а сердце формируется в другом месте. К 44-му часу инкубации сердечная и сосудистая системы соединяются, и сердце начинает биться.Установлены две различные системы кровообращения: эмбриональная система для эмбриона и желточная система, простирающаяся до яйца.

    В конце третьего дня инкубации начинает развиваться клюв и видны зачатки конечностей для крыльев и ног. Перекручивание и сгибание продолжаются в течение четвертого дня. Все тело цыпленка поворачивается на 90° и ложится левым боком на желток. Голова и хвост сближаются, поэтому эмбрион образует букву «С». Рот, язык и носовые ямки развиваются как части пищеварительной и дыхательной систем.Сердце продолжает увеличиваться, даже если оно не заключено в тело. Видно, как бьется яйцо, если его осторожно открыть. Остальные внутренние органы продолжают развиваться. К концу четвертого дня инкубации у эмбриона есть все органы, необходимые для поддержания жизни после вылупления, и можно идентифицировать большинство частей эмбриона. Однако куриный эмбрион нельзя отличить от эмбриона млекопитающих.

    Эмбрион быстро растет и развивается. К седьмому дню на крыльях и лапках появляются пальцы, сердце полностью замыкается в грудной полости, и эмбрион больше похож на птицу.После десятого дня инкубации становятся видны перья и перья, а клюв твердеет. На четырнадцатый день формируются когти, и эмбрион перемещается в положение для вылупления. Через двадцать дней птенец находится в положении высиживания, клюв проткнул воздушную камеру, началось легочное дыхание.

    Через 21 день инкубации цыпленок, наконец, начинает выходить из скорлупы. Цыпленок начинает с того, что просовывает клюв в воздушную камеру. Аллантоис, который служил ему легкими, начинает высыхать, поскольку цыпленок использует свои собственные легкие.Птенец продолжает высовывать голову наружу. Острая роговая структура на верхней части клюва (яичный зуб) и мышца на задней части шеи помогают разрезать скорлупу. Цыпленок отдыхает, меняет положение и продолжает резать до тех пор, пока его голова не выпадет из открытой скорлупы. Затем он отрывается от нижней части корпуса. Птенец измучен и отдыхает, пока не заживут пупочные отверстия и не подсохнет его пух. Постепенно он набирается сил и ходит. Инкубация и вылупление завершены. Роговой колпачок отвалится от клюва через несколько дней после вылупления цыпленка.

    СОБЫТИЯ В ЭМБРИОНАЛЬНОМ РАЗВИТИИ

    Перед откладкой яиц:
    Оплодотворение
    Деление и рост живых клеток
    Разделение клеток на группы специального назначения (ткани)

     

    Между яйцекладкой и инкубацией:
    Нет роста; стадия неактивной эмбриональной жизни

     

    Во время инкубации:
    Первые сутки:
    16 часов — первые признаки сходства с куриным эмбрионом
    18 часов — появление пищеварительного тракта
    20 часов — появление позвоночника
    21 час — начало нервной системы
    22 часа — начало головы
    24 часа — начало глаза

    Второй день:
    25 часов — начало сердца
    35 часов — начало уха
    42 часа — сердцебиение

    Третий день:
    60 часов — начало носа
    62 часа — начало ног
    64 часа — начало крыльев

    Четвертый день — начало языка

    Пятый день — формирование репродуктивных органов и дифференцировка пола

    Шестой день — начало клюва

    Восьмой день — начало перьев

    Десятый день — начало закаливания клюва

    Тринадцатый день — появление чешуи и когтей

    Четырнадцатый день — эмбрион занимает положение, подходящее для разрыва скорлупы

    Шестнадцатый день — чешуя, когти и клюв становятся твердыми и ороговевшими

    Семнадцатый день — клюв поворачивается в сторону воздушной камеры

    Девятнадцатый день — желточный мешок начинает поступать в полость тела

    Двадцатый день — желточный мешок полностью втянут в полость тела; зародыш занимает практически все пространство внутри яйца, кроме воздушной камеры

    Двадцать первый день — вылупление цыпленка

    Качество эмбрионов ЭКО и классификация эмбрионов на 3-й день после экстракорпорального оплодотворения Оценка эмбрионов на стадии дробления – Advanced Fertility Center of Chicago


    Изображение эмбриона «идеального» 8-клеточного эмбриона (эмбрион на 3-й день)
    Фрагментации эмбриона нет, клетки очень ровные, правильные и одинакового размера
    Мы называем это «высококачественным» эмбрионом 3-го дня
    Классификация эмбрионов: 8-клеточный, 4-й класс


    Как проводится оценка и классификация качества эмбрионов на 3-й день развития?

    Существует множество систем оценки эмбрионов, которые различаются тем, как они присваивают оценки, а также тем, указывает ли низкий номер оценки на лучший или худший эмбрион.Мы оцениваем «качество» эмбрионов, полученных в результате экстракорпорального оплодотворения, путем тщательной оценки и оценки некоторых аспектов их внешнего вида.

    Сотовый номер

    Эмбрионы должны иметь от 2 до 4 клеток через 48 часов после забора яйцеклеток и предпочтительно от 7 до 10 клеток к 72 часам. Клетки эмбриона также называют «бластомерами».

    Регулярность клеток – степень регулярности размеров бластомеров

    Как правило, лучше всего, если размеры отдельных клеток (называемых бластомерами) в эмбрионах имеют одинаковый размер.Если это не так, то лучше, если они близки к одинакового размера, а не сильно различаются по размеру.


    Степень фрагментации

    Фрагментация, также называемая пузырением, представляет собой процесс, при котором части клеток эмбриона отрываются и теперь отделяются от ядерной части клетки. Предпочтительно, чтобы фрагментация была незначительной или отсутствовала.

    Тем не менее, фрагментация человеческих эмбрионов встречается довольно часто, и в результате имплантации эмбрионов с фрагментами появилось много прекрасных детей.Многие лаборатории ЭКО, в том числе и наша, оценивают и регистрируют процент фрагментации в каждом дне 3 эмбриона. Эмбрионы с фрагментацией более 25% имеют низкий имплантационный потенциал.


    Наличие многоядерности

    Эмбрион считается многоядерным, если в любой отдельной клетке на 2-й или 3-й день можно увидеть более одного ядра. После 3-го дня чрезвычайно трудно определить наличие многоядерности. Показано, что подавляющее большинство многоядерных эмбрионов являются хромосомными аномалиями.

    Однако иногда многоядерные эмбрионы имплантируются и приводят к здоровой беременности и рождению нормального ребенка. Эти эмбрионы обычно переносятся в матку только в том случае, если они единственные доступные.


    Дополнительные факторы, связанные с классификацией эмбрионов и отбором для переноса

    Также отмечены другие аспекты микроскопического вида эмбрионов , включая наличие вакуолей, зернистость, толщину внешней оболочки (или zona pellucida) и т. д.


    Слегка фрагментированный 8-клеточный эмбрион
    Выполняется вспомогательный хэтчинг
    Удерживающая пипетка крайняя слева
    На 7 часов хорошо виден сперматозоид (этот сперматозоид проиграл гонку)
    Этот эмбрион имеет высокое качество, потому что он имеет оптимальное количество клеток, клетки имеют одинаковый размер и минимальную фрагментацию.

    Оценка эмбрионов: 8 клеток, степень 3



    Этот 5-клеточный эмбрион умеренно фрагментирован и имеет клетки неравномерного размера (неправильные)
    Ожидается, что этот эмбрион будет иметь значительно более низкую вероятность имплантации, потому что он несколько «медленный» (более 5 клеток предпочтительнее на 3-й день), а также из-за значительной фрагментации и неравномерности клеток.

    Оценка эмбрионов: 5 клеток, степень 2



    Этот эмбрион сильно фрагментирован и имеет клетки неравномерного размера
    Это некачественный эмбрион 3-го дня
    . У этого эмбриона, вероятно, не так много шансов имплантироваться и сделать жизнеспособную беременность.

    Оценка эмбрионов: 6 клеток, степень 1



    Фотография сильно фрагментированного и очень плохого качества эмбриона 3-го дня
    Этот эмбрион практически нежизнеспособен и дегенерирует
    Он не сможет продолжить нормальное развитие и имплантироваться

    Оценка эмбрионов: 2 клетки, степень 0



    Многоядерный 2-клеточный эмбрион
    Множественные ядра (круглые структуры, похожие на лунные кратеры) видны в обеих клетках
    Этот эмбрион не имеет потенциала долгосрочной жизнеспособности.

    Обычно определение «качества» не проводится, по крайней мере, через 48 часов после забора яйцеклетки.  Однако некоторые лаборатории ЭКО тщательно оценивают эмбрионы в первый день после извлечения яйцеклетки на стадии зиготы или 1-клеточного эмбриона. Они используют морфологические параметры пронуклеусов в первый день как часть общей оценки качества эмбриона, а также как часть критериев отбора лучших эмбрионов для переноса. Эта оценка в первый день является интересным инструментом, но не было доказано, что она последовательно действительна в разных лабораториях.

    К 48 часам («день 2») эмбрионы должны состоять как минимум из 2 клеток – иначе они «арестованы» .Мы предпочитаем, чтобы к тому времени хотя бы некоторые из них находились на стадии 3 или 4 клеток.

    К 72 часам («день 3») мы хотели бы видеть по крайней мере 6 клеток, а лучше всего около 8 клеток. Мы видели детей, которые произошли от 4-клеточных эмбрионов на 3-й день, но шансы на беременность значительно возрастают с увеличением числа клеток.

    Эмбрионы с большим количеством клеток, регулярно выглядящими клетками и незначительной или отсутствующей фрагментацией имеют более высокую общую вероятность имплантации, чем другие эмбрионы с меньшим количеством клеток, большей неравномерностью и значительной фрагментацией.


    Качество эмбриона, как мы его видим под микроскопом в лаборатории ЭКО, дает нам разумную возможность прогнозировать шансы на беременность после процедуры переноса эмбриона . Однако из-за того, что существует множество других факторов, которые мы не можем увидеть или измерить, обобщения о «качестве», сделанные на основе классификации эмбрионов, часто неточны.

    Мы видим, что некоторые циклы прерываются после переноса 3 прекрасно выглядящих эмбрионов, и мы также видим красивых детей, рожденных после переноса только одного «плохого» эмбриона.Истинный генетический потенциал эмбриона для продолжения нормального развития очень трудно точно измерить, если только мы не используем преимплантационный генетический скрининг (ПГС) для выбора хромосомно нормальных эмбрионов для переноса.

    Хромосомное тестирование с помощью ПГС проводится на нескольких клетках, которые удаляются из эмбрионов на стадии расширенной бластоцисты с помощью биопсии трофэктодермы. Когда выполняется PGS, эмбрионы замораживаются после биопсии, потому что результаты генетического тестирования не приходят достаточно быстро, чтобы сделать перенос свежего эмбриона.В этих случаях мы делаем перенос замороженных эмбрионов примерно через 4 недели.

    • Частота имплантации эмбрионов значительно выше у эмбрионов с нормальными результатами PGS-теста по сравнению с эмбрионами без скрининга
    • Следовательно, истинное качество эмбриона в значительной степени зависит от хромосомной нормальности
    • Для эмбриона полезно получить высокую оценку по морфологии
    • Однако гораздо важнее быть хромосомно нормальным в определении его судьбы

    Важной переменной, которую часто упускают из виду, является метод переноса эмбрионов .Плавный перенос без травмирования слизистой оболочки эндометрия необходим для того, чтобы дать эмбрионам наилучшие шансы на имплантацию и продолжение нормального развития.

    В конечном счете, истинным критерием качества эмбриона является то, нормально ли он имплантируется и развивается и в конечном итоге отправляется домой из больницы с мамой и папой . Другими словами, системы оценки эмбрионов несовершенны, и нам всегда нужен тест на беременность и окончательный исход беременности, чтобы сказать нам о «качестве эмбриона» больше, чем может показать микроскоп.

    Большинство клиник ЭКО «оценивают» каждый эмбрион, используя одну из многих систем оценки. К сожалению, нет никакого согласия относительно того, какую систему использовать. Мы все думаем, что у нас есть лучшая – и что остальной мир должен использовать нашу систему – в мире ЭКО много эгоистов.

    Пациенты часто спрашивают, не приведут ли эмбрионы, которым эмбриолог поставил «низкую оценку», к проблемам с ребенком. Насколько нам известно, дети, рожденные из эмбрионов низкого сорта, такие же милые, умные, сильные и т. д.как те, которые рождаются из эмбрионов высокой степени развития. Единственная разница, по-видимому, заключается в шансе эмбриона (ов) привести к беременности.


    Качество эмбриона в значительной степени определяется качеством яйца, из которого он вышел. Тесты овариального резерва, такие как оценка гормона ФСГ на 3-й день и подсчет антральных фолликулов, могут дать нам полезную информацию о количестве яйцеклеток, но бесполезны для прогнозирования качества яйцеклеток.

    Если бы мы могли улучшить качество яйцеклеток, с которых мы начинаем ЭКО, у нас было бы больше шансов на успешный результат.Однако по большей части качество яиц предопределено и «мы получаем то, что она дает».

    Качество яйца в основном определяется хромосомной и генетической компетенцией отдельного яйца. Не существует лечения для исправления хромосомных или генетических дефектов. Поэтому мы делаем все возможное с полученными яйцеклетками или перед переносом проверяем хромосомный статус эмбрионов на стадии бластоцисты.

    Получая большое количество яйцеклеток, у нас больше шансов получить одну или несколько яйцеклеток «высокого качества» — другими словами, яйцеклетку, которая полностью компетентна и способна к оплодотворению, нормальному развитию, имплантации и дальнейшему развитию здорового ребенка. .

    Узнайте, как количество яйцеклеток, полученных с помощью ЭКО, влияет на шансы на успех

    Качество процесса стимуляции яичников и качество самой лаборатории ЭКО также являются очень важными переменными, влияющими на качество получаемых эмбрионов.

    Временная шкала с изображениями развития эмбриона при ЭКО

    Многим пациентам с бесплодием интересно, что именно происходит в эмбриологической лаборатории с момента извлечения их яйцеклеток до момента их переноса.Когда у людей есть ответы на вопросы о деталях развития эмбриона, ЭКО может стать для них менее загадочным процессом.

    Имея это в виду, вот ежедневная хронология того, что происходит в эмбриологической лаборатории при ЭКО.

    День 0: День поиска

    Это день вашего возвращения. В день 0 яйцеклетки извлекаются из фолликулов, возникших в результате стимуляции яичников. В это время полученные яйца подсчитываются и оцениваются на зрелость/качество.

    Сперма также подготовлена ​​для осеменения или ИКСИ полученных яйцеклеток. Примерно через 4-6 часов после извлечения яйцеклетки будут осеменены или введены сперматозоиды (ИКСИ). На этом изображении показано зрелое яйцо (метафаза II) в момент ИКСИ.

    День 1: В поисках оплодотворения

    Яйцеклетки оценивают на предмет оплодотворения, слияния или соединения яйцеклетки и спермы примерно через 16–18 часов после осеменения. Нормальное оплодотворение — это наличие двух пронуклеусов, одного из яйцеклетки и одного из сперматозоида.

    Если пронуклеусов слишком мало или слишком много, такой эмбрион считается аномально оплодотворенным. Все нормально оплодотворенные эмбрионы помещаются в специальную среду, имитирующую трубную жидкость человеческого организма.

    На изображении в золотых тонах (вверху справа) показан нормально оплодотворенный эмбрион. На черно-белом изображении (вверху слева) показан аномально оплодотворенный эмбрион.

    День 2: Проверка нормального клеточного деления

    Кратко осматривают эмбрионы для оценки клеточного деления.У большинства эмбрионов на 2-й день будет от 2 до 4 клеток. На изображении справа показан 2-дневный 4-клеточный эмбрион.

    Если к этому времени эмбрион не разделился, он считается нежизнеспособным.

    В это время эмбриология решит, будет ли перенос на 3-й или 5-й день. Обычно это зависит от качества клеточного деления эмбрионов и количества доступных эмбрионов.

    День 3: ПГД-биопсия и возможный перевод День

    День 3: Эмбрионы на этой стадии обычно имеют 6-8 клеток.Если у вас перенос эмбриона, может быть выполнено вспомогательное вылупление зоны, проделывание бреши в оболочке эмбриона.

    В этот день также может проводиться биопсия эмбриона для ПГД (преимплантационной генетической диагностики). Если у вас нет переноса, эмбрионы помещаются в новую среду, которая имитирует маточную жидкость человеческого тела.

    День 4: уплотнение

    Ваши эмбрионы продолжают расти и превращаться в компактный клубок клеток, всего около 16, известный как морула.Если в этот день уплотнение не начинается, скорость образования бластоцисты снижается. На этом изображении показана уплотненная морула 4-го дня.

    День 5: Формирование бластоцисты

    На 5-й день эмбрион превращается в бластоцисту. На этой стадии обычно можно оценить внутреннюю клеточную массу (ICM), фетальный компонент и клетки трофэктодермы (TE), плацентарный компонент эмбриона. Перенос эмбрионов часто проводят на 5-й день, а также криоконсервацию любых полностью разросшихся бластоцист.Любые оставшиеся жизнеспособные эмбрионы, которые не полностью развиты, культивируются для возможного замораживания на 6-й день.

    День 6: последний день для передачи или заморозки

    День 6: Эмбрионы на 6-й день должны быть либо пересажены, если перенос не был сделан на 5-й день, либо заморожены.

    Все нежизнеспособные эмбрионы удаляются. День 6 — последний день, когда эмбрион может оставаться в лаборатории без переноса или криоконсервации.

    Клетки кожи человека, измененные для имитации ранней стадии развития эмбриона

    Донна Лу

    Структуры iBlastoid выглядят как настоящие человеческие бластоцисты

    Университет Монаша

    Живые структуры, моделирующие раннее эмбриональное развитие человека, полностью созданы из клеток кожи.Модели означают, что должна быть возможность изучать бесплодие, ранние выкидыши и раннее эмбриональное развитие без противоречивого использования реальных человеческих эмбрионов, хотя модели могут поднимать собственные этические проблемы.

    Раньше единственным средством изучения раннего развития человеческих эмбрионов было использование бластоцист, полученных в результате процедур ЭКО. Бластоцисты представляют собой шарообразные образования на ранней стадии эмбрионального развития, которые формируются через пять дней после оплодотворения и могут формировать эмбрионы.Но их использование в науке вызывает споры из-за их способности превращаться в живого человека.

    Теперь, путем перепрограммирования фибробластов, клеток соединительной ткани, взятых из образцов кожи, Хосе Поло из Университета Монаша в Мельбурне, Австралия, и его коллеги создали структуры, подобные бластоцистам человека.

    «Впервые у людей мы создаем эмбриональную структуру без какого-либо яйца», — говорит Джейсон Лимниос из Университета Бонда в Голд-Косте, Австралия, который не участвовал в исследовании.«Это большое дело».

    Структуры, которые команда назвала iBlastoids, могут быть использованы для моделирования первых двух недель эмбрионального развития.

    iBlastoids структурно и генетически очень похожи на настоящие человеческие бластоцисты, но не идентичны. Например, у iBlastoids отсутствует zona pellucida, мембрана, которая окружает бластоцисту до того, как она имплантируется в матку. «Это то, что мы никогда не сможем смоделировать», — говорит Поло.

    «Сейчас вы не можете имплантировать это женщине и сделать ее беременной», — говорит Лимниос.«Он не вырастет в плод или ребенка, потому что у него отсутствуют некоторые из наиболее важных структурных частей».

    Команда использовала технику, называемую перепрограммированием ядер, для создания iBlastoids. Они взяли фибробласты у взрослых доноров и, изменив экспрессируемые в клетках гены, изменили их свойства.

    При помещении в трехмерный каркас, известный как внеклеточный матрикс, клетки самопроизвольно организуются в сферические структуры, содержащие отдельные слои клеток, которые содержат бластоцисты человека.

    iBlastoids могут давать начало плюрипотентным стволовым клеткам – клеткам, способным к самообновлению и дифференцировке в различные типы клеток организма. Они могли бы способствовать продвижению исследований бесплодия, позволяя ученым изучать, что происходит, когда эмбрионы подвергаются воздействию токсинов или вирусов на ранних стадиях развития. По словам Лимниоса, теперь все это можно было сделать без использования настоящих человеческих эмбрионов.

    Тем не менее, любые новые открытия, сделанные с использованием iBlastoids, возможно, должны быть подтверждены с использованием реальных человеческих бластоцист, говорит Поло, хотя их использование может позволить проводить исследования в большем масштабе, чем это возможно прямо сейчас.

    «Вы можете использовать 1000 или 10 000 iBlastoids, чтобы обнаружить что-то, а затем вы можете пойти и проверить это открытие на трех бластоцистах», — говорит он.

    Разработка эмбрионоподобных моделей вызывает этические и юридические вопросы. Во многих странах человеческие эмбрионы нельзя законно культивировать в лаборатории дольше 14 дней, хотя есть планы рассмотреть возможность изменения правила. По словам Поло, теперь необходимо обсудить, следует ли расширить этот предел для iBlastoids, учитывая, что они не являются настоящими человеческими эмбрионами.

    «Закон должен идти в ногу с наукой», — говорит Лимниос. «До этого времени все будут уважать действующие законы и обращаться с этими iBlastoids, как с эмбрионами».

    Ссылка на журнал: Nature , DOI: 10.1038/s41586-021-03372-y

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.